不同寄主植物棉蚜抗性基因探究.pdfVIP

424 走向2l世纪的中国昆虫学 不同寄主植物棉蚜抗性基因研究 金莹 赵章武 冯国蕾 李梅 谢佳燕 何凤琴’o (中国科学院动物研究所，农业虫害鼠害综合治理研究国家重点实验室，北京100080) 摘要本文用PCR方法扩增不商寄主植物上棉蚜的基因组DNA，在抗性最高 的棉蚜种群中获得4个长度分别为550．480，250和150bp左右的扩增产物．很可能 是拂蚜的抗性相关基固．在其它种群中没有这四个产物。在不接触杀虫剂3个月后， 高抗性韩蚜种群的后代有抗性衰退现象。 关■词棉蚜抗性基因HR 地区棉蚜种群个体a—NA酯酶的频率分布，以及有机磷杀虫剂对其的抑制频率分布，可正确 eLI，1996；赵章武等．1996；李梅 区分棉蚜种群中敏感、抗性和杂合子所占的比例(Feng，et lnoue，1987；郑炳宗等，1988；Saito，1989；Abdel一^a1，elal，1990；王健等，1996；高希武 等，1998)，但是否也存在抗性基因扩增尚无报道。棉蚜抗性分子遗传和基因方面的研究报道 较少。本文用常规PCR方法扩增棉蚜基因组DNA，初步探索棉蚜的抗性相关基因。 在某些事例中，抗药性是由于编码解毒酶的基因扩增造成的。由于结构基因的拷贝数增 多，过量合成的解毒酶代谢或与杀虫剂螯合，从而增加害虫对杀虫剂毒力的抵抗能力。由基 因扩增而导致的害虫抗药性的证据主要来源于对桃蚜、蚊虫和家蝇对有机磷杀虫剂的抗性研 子机翻的研究具有重要的理论和实际意义。 1实验材料与方法 1．1实验材料 1．1．1本实验所用蚜虫及采集地点： 花椒、木槿、冬青、石榴采自北京海淀。 乞基鑫震犀鲁。九五”国家科技攻关和国家白然科学基金重点项目伯963021∞资助通讯作者 药剂毒理 425 1．1．2实验药品 引物，北京格莱克斯公司合戚；TaqDNAse．中国农业大学生物系产品；dNTPs，北京鼎国 产分析纯试荆。 1．2实验方法 1．2．1生物测定 将100pl一定浓度的杀虫剂丙酮液均匀涂布在5ml小玻璃瓶及封I=l膜，室温放置丙酮挥 发。用丙酮作对照。每瓶放15—20头无翅成蚜，每浓度重复三次，5小时后检查死亡教，死 亡标准为轻触虫体时试虫不动。计算死亡率。 1．2．2群体棉蚜基因组DNA的提取： 化过夜。Tris饱和酚提取DNA(参见卢圣栋，1993)。 1．2．3引物： eta1．1993)，设计台成两个 参照桃蚜(Myzu*pers／cae(Su]xer))的酯酶E4保守序列(Field 引物： ACATGTTCGGCG托一3’ CAG邢1-rc 引物1：5’一CTG GCT GGTCTG一3’ c订C,CTA。I℃GCClTr 引物2：5’一AAG 1．2．4PCR反应体系 各100rig，2．5出10 后加25m石蜡油覆盖．稍离心后于PCR仪中扩增。94t预变性5分钟后进入以下循环(40 保存。’ 1．2．5产物检测分析 扩增产物在含0．04％EB的1．5％琼脂糖凝胶上进行电泳。上样量为15一，电泳缓冲液为 1×TAE，7．5Vitro恒压电泳70min，紫外透射仪上观察，成相。 2结果与分析 2．1生物测定 杀虫剂对不同寄主植物棉蚜的毒力见表l。结果表明鼠李和石榴上的棉蚜对有机磷杀虫 剂最敏感；花椒、冬青上的棉蚜对敌敌畏有较高抗性；术槿上的棉蚜对甲基对硫磷有较高抗 性。表明不同寄主植物棉蚜对不同杀虫荆的抗性有一定差异。而高密棉蚜对各种不同杀虫剂 的抗性程度都很高。 2．2不同青主檀物棉蚜种群扩增产物 426 走向21世纪曲中国昆虫学 而在其它的5种群中投有。北京棉蚜的扩增产物中没有高密棉蚜的4个特异性