cry3A基因转化苏云金芽孢杆菌野生型菌株地研究.pdfVIP

杀虫微生物专刊 Issue 武汉大学学报(自然科学版) Special 1998年10月 j．WuhanUniv．(NaturalScienceEdition) Oct．1998：51～52 cry3A基因转化苏云金芽孢杆菌野生型菌株的研究’ 乐超银2 刘子铎1 李 林1 江 昊1 魏 芳1 喻子牛1 (n华中农业大学微生物科技系，农业微物生物农业部重点实验室芽胞杆菌分子生物学研究室 武汉430070；”湖北三峡大学理I学院化I系，宜昌443003) 摘要将对鞘翅目昆虫有特异毒性的cry3A基因，通过电转化方法转化到对鞘翅目昆虫具有高毒力的野生 转化子YBT一005中高效表达，而原受体菌中所含大部分质粒发生丢失，cryl基因的表达受到抑制．生物定结果显 示，YBT一005对柳兰叶甲(鞘翅目)毒力较高，LCso值为0．159 618 mg／L，但对小菜蛾(鳞翅目)毒力较低，LC…1 mg／L，比受体菌YBT一803一i1的LEs。值(1．087mg／L)低6倍． 关键词苏云金芽孢杆菌，cry3A基因，柳兰叶甲，小菜蛾 分类号Q78 杀虫晶体蛋白(InsecticidalCrystalProtein，简 终浓度为259／L． 称ICP)是苏云金芽孢杆菌的主要杀虫活性成分，编1．3电转化 Rad 码ICP的基因(cry基因)绝大多数定位在质粒上，参照Schurter的方法“3，电脉冲仪为Bio 这些质粒的拷贝数较低，因而限制了其表达水平、不 公司产品，型号为165—2075． 同的cry基因，因其杀虫特异性，杀虫谱较窄．国内 1．4质粒抽提 外利用接合转移、原生质体融合和电击转化等方法， 参照文献E33进行． 可将质粒DNA转入苏云金芽胞杆菌”]．本研究采1．sPCR鉴定 1rain， 用电转化方法，将对鞘翅目具特异毒性的cry3A基 引物设计参照文献[33．扩增条件：94。。C 53℃2 rain，72℃3 因转入一株含cryI基因且对鳞翅目有高毒力的野 rain，25～30个循环． 生型菌株中，以期消除一些非ICP编码质粒，进一 1．6SDS—PAGE分析 步提高毒力，扩大杀虫谱，结果报告如下． 参照文献[33方法． 1．7生物测定 1材料和方法 用初孵柳蓝叶甲(P的llodecta 3龄小菜蛾(Phutlla h． 间为48 1．1菌种和质粒 供体质粒：pBMB3305含cry3A基因，携带AP 抗性． 2结果和讨论 受体菌：苏云金芽胞杆菌YBT～803一l，均由华 中农业大学农业微生物重点实验室提供． 2．1 1．2培养基 将含cry3A基因的质粒从