蚕丝丝素膜非标记电位免疫传感器地研究.pdfVIP

电分析化拳进展·1999 C24 蚕丝丝素膜非标记电位免疫传感器的研究+ 彭图治祝方猛杨丽菊 陈建勇卢杜林 (浙江夫掌西津校区化学系 杭州 3100曲) (浙江丝绸工学院纤维工程分院杭州 310033) 丝素作为生物材料有许多优点：致密，无毒，与人体有亲和性，在生命科学、医学、药学、高 分子材料科学等领域有着广泛的应用。它有良好的透氧性和透光率，能够抵抗蛋自分解酶的破 坏，又能减轻人体的抗异反应，可以成为优良的人工组织替代材料；经甲醇处理后有足够的强 度和弹性，对大多数常用溶剂都相当稳定；甚至还能控制可离子化药物的缓释和从乙醇溶液中 分离出水等。丝素膜已被用于酶电极生物传感器[1“]。丝褒膜作为固定酶的载体材料o“]，固定 化过程只涉及极少的化学试剂，词定荣件比较温和，大大减少亍酶的失活，增加了酶的利用效 率。但是利用丝素膜固定抗体。雷内外鳞有报道“。实验发现，饕丝丝素膜固定抗体具有很多优 点，并可用多种方法固化，且条件温和，不影响抗体活性及抗原抗体之间的免疫反应。 本文研究了蚕丝丝素膜的制备方法和条件，以及直接物理吸附法、直接化学交联法、羟胺 活化化学交联法、盐酸括讹化学交联法j叠氮法、重氟法等固定抗体的方法，比较了各种方法固 定抗体后用于乳腺癌标志物非标记免疫传感器的澍定结果，制作了盐酸活化化学交联法固定 抗体免疫传感器测定乳腺癌标志物的标准曲线。探讨了测定的重现性和干扰情况。该传感器 灵敏度高、制备和操作简便：样品用量少、电极稳定等优点，可望用于临床分析。 ，各种固定方法的电位睛应结果见表1。从表中可以看出，盐酸聒化法、重氪法、叠氮法的效 果较直接吸附法、直接交联法、羟胺话化法要好，其中以盐酸括化法的效果最好。 ‘ 表1各种固定方法前电位响应鼓果 抗体固定方法 电位响应(△mV 直接毂附法 2 直接交联法 5 羟胺活化{去 6 盐酸活化法 12．7 重氮法 10 叠氮法 1l △mv：240U．ml_1样品膜电位与15U．m11样品膜电位之差 图1为采用盐酸活化法固定了抗体的丝素膜片，与120u．ml。样品血清作用，以及与阴性血清 作用后的电位随时问变化的情况。膜电位响应随时间而迅速上升，并在5min内有一个最大 值，然后略有下降。阳性血清复合物膜的电位值要高于阴性血清复合物膜的电位值。 取含乳腺癌标志物浓度为o、15、30、60、120、240U．ml_1的标准血清与盐酸活化法制备的 抗体膜制备成抗原抗体复合物膜，测定各膜电位与阴性血清膜电位之差．与抗原浓度的对数作 -渐讧省岛赫科学基盘私分析测试基金贳助项B中辩皖电分析化学开放薯验室墓生资助项目 ·188· 电分析化学进展·1999 标准曲线。线性范围15～240U．m1～，回归方程：△E一 一7．4+10．6lg[Ag]，相关系数r=o．9996。 在电极管中加了一个内管，并在内管的外面加装了 一个屏蔽保护装置，使电极的稳定性大大增强。取1z片 膜，分别在线性区间的4个不同的乳腺癌标志物浓度。F 处理后进行测定，各膜片膜电位的相对标准偏差均小于 4％，说明膜片的重现性和均匀性较好。 50“g．ml_1铁蛋白(Fer}itin)，40ng．ml_1癌胚抗原 (CEA)，60U胃肠道癌抗原19—9(CAl9—9)，100“g．ml-1 AFP代替乳腺癌标志物血清样品制作复合物膜片，与乳 腺癌标志物阴性血清复合物膜片比较，电位响应值均小 于3mV，表明血清中常见抗原对乳腺癌标志物的测定基