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基因操作原理题库2008 版 名词解释： 1. 亚基因组文库：挑选基因组DNA 的特定部分所构建的基因文库，可用质粒DNA ，线粒体DNA ，限制性DNA 片段来构建。可通过Southern 杂交，用探针找出目标基因所在的限制性片段的大小，然后用相应大小的限制性 DNA 片段构建出基因文库。 2. 反向PCR ：反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段。实验时选择已知 序列内部没有切点的限制性内切酶对该段 DNA 进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接， 再用一对反向的引物进行PCR ，其扩增产物将含有两引物外未知序列，从而对未知序进行分析研究。 3. 系统缺失：即嵌套缺失，逐步从感兴趣的DNA 的一端或两端删除多个寡核苷酸，得到一套终末端长短不同的 嵌套缺失突变体，这个突变群体也称渐次截断文库。嵌套缺失在研究基因或蛋白质结构与功能关系、蛋白质折 叠机理和酶切催化机理等方面有重要作用，如界定基因的最小功能单位、蛋白质独立折叠单位和酶结构域的功 能。 4. 星星活性：在极端非标准条件下，如酶过量、离子强度低、pH 过高等条件下，限制酶能切割与识别序列相似的 序列，这个改变的特殊性称星星活性，星星活性也是限制性内切酶的一般性质。 5. 体外分子进化：是指不需事先了解 DNA 或蛋白质分子的空间结构和催化机制，人为地创造特殊的进化条件， 模拟自然进化机制，在体外对目标基因进行改造，并定向筛选、获得具有某些预期特征的进化分子。 6. ISM(iterative saturation mutagenesis) ：即反复饱和突变，是在已知蛋白质结构前提下，合理选择酶分子某一位 点的一个、两个或三个氨基酸进行反复饱和突变，然后筛选酶活性提高的突变株。 7. 质粒拯救：一种用来帮助枯草芽孢杆菌和其他革兰氏阳性菌摄入外来质粒的技术。由目的 DNA 和载体组成的 外来质粒进入宿主后会被宿主里的酶系切成线状，除非它与宿主里的同源质粒重组，否则就会被破坏。同源质 粒和外源质粒各有不同的抗生素抗性基因，最后筛选双抗菌株就可保证获得所要的DNA 。 8. 同裂酶：识别相同序列的不同的限制性内切酶，但它们的切割位点可能不同。 9. 定点饱和诱变：对基因的某一小区域内碱基进行多种形式的置换（在关键位置引入不同的氨基酸探寻何种替换可 以获得最大活性）。 10. 噬菌体表面展示(phage display techniques, PDT) ：是以改造的噬菌体为载体，把待选基因片段定向插入噬菌体 外壳蛋白质区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白 质的噬菌体，最终获得具有特异结合性质的多肽/蛋白质，由于外源蛋白或多肽的基因型和表型统一在同一噬菌 体颗粒内，因此，通过表型筛选就可以获得它的编码基因。 11. RNAi ：外源或内源性的双链RNA(dsRNA)进入细胞后引起与其同源的mRNA 特异性降解，抑制相应基因表达， 表现出特定基因缺少表达的现象，属转录后的基因沉默。 12. 自杀质粒：通常为R 质粒的衍生质粒，常有宿主范围广的特点，具有接合转移基因。它的复制需要一种特殊的 蛋白，大多数细菌不产生这种蛋白质，因此，当进入寄主细胞时，要么不能复制，被消除，要么被整合入染色 体上，和染色体一起复制。利用自杀质粒的这个特点，将基因工程技术构建的基因缺失的 DNA 片断，克隆入 自杀质粒，利用缺失基因两端的同源片断，定位自杀质粒的整合位点。利用同源性DNA 片断可发生重组的原 理，构建精确基因缺失菌株。在多数情况下，利用自杀质粒，可随心所欲缺失大多数基因的任何部分。 自杀质粒应具备以下条件：①自杀质粒在受体菌中不能复制；②自杀质粒必须带有一个在整合到染色体内 以后可供选择的抗性标记；③自杀质粒带有易于克隆的多克隆位点。 13. TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)：即热不对称交错PCR 。在分子生物学研究中，该技术常用来 分离与已知DNA 序列邻近的未知序列。其基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计 3 个嵌套的特异性引物 (sp1，sp2，sp3，约20bp)，用它们分别和1 个具有低Tm 值的短的随机简并引物(AD，约14bp)相组