SARS病毒形态学 - 北京大学医学图书馆.docVIP

SARS病毒形态学 ? 我国第一例SARS死亡患者的病理尸体解剖是丁彦青等[1，2] 于2月11日在广州南方医院病理科进行的，很快2月13日尸检病理诊断报告为病毒性肺炎。现在看来这个病理诊断是及时正确的。问题是什么病毒会引起如此严重的致死性肺炎，是已知病毒，还是一种新病毒，这就需要应用电镜根据病毒的形态学和形态发生学超微结构特征来加以分析和判断。在应用电镜诊断SARS病原的过程中，早在2003年2月26日军事医学科学院微生物流行病研究所已在SARS尸检组织细胞培养物中通过负染电镜发现了很典型的冠状病毒粒子，但因为种种原因，未能及时向外界公布，错失良机[3]。4月8日香港大学Queen Mary医院微生物和病理系报道成功地检出SARS相关冠状病毒[4]，4月10日世界卫生组织（WHO）确认一种新的冠状病毒与SARS相关[5]，而中国北京疾病预防控制中心（CDC）病毒病预防控制所有关专家的衣原体之说从2月18日开始一直是媒体报道的热点。4月16日中国科学院基因组研究所从军事医学科学院微生物流行病研究所送检的4个不同的SARS病毒培养分离物中读出全病毒基因序列，进一步证实冠状病毒是一种新的传染性因子[6]。 第一节 SARS病毒电镜形态学诊断的正确方法 一、SARS患者生前肺活检组织（细针穿刺）和支气管肺泡冲液是电镜快速检出冠状病毒的首选样品 香港大学Queen Mary医院微生物和病理系的Peiris等[4]是最早报道应用负染和超薄切片电镜技术从SARS患者生前肺活检组织以及鼻咽部吸出物的病毒分离培养物中发现冠状病毒的。继而，Ksiazek等[5]从第一例医院内感染的男性医生的鼻咽部和咽拭子样品的病毒分离培养物中也检出SARS相关冠状病毒。他们还在一例SARS患者的支气管肺泡冲洗液中检出感染冠状病毒的脱落上皮细胞，在细胞内和细胞外均查见许多病毒粒子。经验证明，直接从病理尸检脏器组织的超薄切片中检出病毒，并诊断、鉴定病毒到科几乎是不可能的。原因很简单，在电镜生物样品制备中，标本的固定非常关键，组织一旦离开血液供应，必须立即用固定液固定，间隔时间越短越好。有人观察，如果延误15-30秒固定，线粒体内致密颗粒就会减少或消失；延误15-30分钟，线粒体肿胀，内质网扩张呈小泡状，核染色质边集；延误45分钟后，线粒体内出现絮状沉淀物[7]。如果时间再长便会产生细胞自溶，不仅正常细胞的微细结构不可避免的产生损伤和破坏，在活细胞内寄生、增殖的各种病原微生物（包括病毒、立克次体和衣原体等）也会同时失去原有的形态特征，因而难以作出正确的判断和鉴定，甚至会造成误诊[8]。 二、分离病毒阳性的培养细胞是电镜诊断、鉴定病毒的最佳样品 作为病理工作者可以应用电镜从活检组织、支气管肺泡冲洗液或其他体液的脱落活细胞中检出病毒，但临床采集样品的难度较大，还可能因采集不够及时，出现组织细胞自溶，细胞超微结构和病毒的形态学特征难以保存完好。另外，患者脏器组织中病毒感染病灶往往很局限，而电镜取材又要求大小不超过1 mm3，以确保细胞固定良好，因而很难在病变细胞的超薄切块中找到病毒。所以对怀疑病毒感染的组织或体液（含血液）多数需要在病毒实验室经过体外接种敏感细胞（原代或传代细胞），待病毒增殖后出现细胞病变（CPE）方有可能检出病毒；也可以通过接种敏感实验动物获得阳性病毒样品。Peiris等[4]最先在电镜下发现的冠状病毒就是从分离培养病毒的胚胎猴肾细胞的提取液经超速离心纯化后，在负染电镜样品中检出的。军事医学科学院微生物流行病研究所在负染电镜下最早发现的冠状病毒也是从SARS死亡患者尸检肺组织通过在绿猴肾细胞（Vero-E6）上分离培养获得的[3]，后经超薄切片证实其形态学和形态发生学超微结构特征符合冠状病毒科（Coronaviridae）的成员[9]。 ? 第二节 冠状病毒的分类、命名及其形态结构特征 一、冠状病毒的分类与命名[10] 冠状病毒科（Coronaviridae）成员均为单链RNA病毒，在分类学上和动脉炎病毒科（Arteriviridae）同属于巢病毒目（Nidovirales）。该科病毒又分两个属（Genus）：冠状病毒属（Coronavirus）和环状病属（Torovirus）。冠状病毒的命名学结构如下： 冠状病毒的命名学结构（Taxonomic Structuce of Coronavirus） 目（Order）巢病毒目（Nidovirales） 科（Family）冠状病毒科（Coronaviridae） 属（Genus）冠状病毒属（Coronavirus） 冠状病毒属内的各种病毒（Species in the Genu） 第一组病毒（Group 1 Species） 犬冠状病毒（Canine coronavirus , CCoV） 猫冠状病毒