用重组酶介导扩增技术快速扩增核酸.pdfVIP

中国科学: 生命科学 2010 年 第40 卷 第10 期: 983 ~ 988 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 用重组酶介导扩增技术快速扩增核酸 ① ② ④ ③ ① ① ① ② 吕蓓 , 程海荣 , 严庆丰 , 黄震巨 , 沈桂芳 , 张志芳 , 李轶女 , 邓子新 , 林敏①, 程奇①* ① 中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081; ② 上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢教育部重点实验室, 上海 200240; ③ 宁波华越生物技术有限公司, 宁波 315100; ④ 浙江大学生命科学学院, 杭州 310058 * 联系人, E-mail: chengqi@ 收稿日期: 2010-08-09; 接受日期: 2010-08-22 摘要 体外核酸快速扩增技术是一种可使微量核酸在体外高效快速扩增的技术, 自问 关键词 世以来, 被广泛应用于分子生物学、医学和法理鉴定等领域, 并被不断改进, 以使其功能 重组酶 细菌 和适应性更为广泛. 重组酶介导扩增法是在现有体外核酸扩增原理的基础上发展起来的 体外核酸扩增 恒温体外快速扩增核酸技术. RAA 法利用重组酶、单链结合蛋白和DNA 聚合酶代替了传 常温快速扩增 统PCR 的热循环解链过程, 实现了在37℃恒温下的核酸快速扩增, 无需特殊的辅助仪器, 对操作人员的要求也不高, 具备简单、节能、便携、快速等特点, 有望在不远的将来取代 传统的热循环PCR 反应. 自核酸体外扩增技术出现以后, 就以惊人的速 链解旋, 并促使特异性 DNA 片段扩增, 以达到核酸 度被应用到与核酸研究相关的领域. 目前, 传统的聚 体外扩增的效果[2]. 恒温核酸体外扩增技术的出现, 合酶链式反应, 简称 PCR 技术, 已成为诸多生物学、 再次扩大了 PCR 技术的应用范围, 并使其操作更加 医学实验室、检测机构和生物医药公司的常规实验方 便捷. 相对于传统的热循环核酸体外扩增技术, 恒温 法. 传统的 PCR 技术是一个热循环的过程, 包括高 技术的应用是一次全面升级. 温变性、退火和延伸 3 个环节. 通常在 35 个循环之 在现有的几种恒温核酸体外扩增方法中, 环介导 后, 微量的 DNA 模板即被特异性地扩增到可以被仪 基因恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplifica- 器检测到的数量. 因常规 PCR 反应需要核酸扩增仪 tion, LAMP)[3]和重组酶聚合酶扩增技术(recombinase 作为辅助工具, 因此反应始终受到电力、成本以及空 polymerase amplification, RPA)[4]是两种相对比较成 间等因素的制约, 从而限制了该技术在实验室之外 熟的新技术. 的应用. LAMP 扩增方法的核心是使用链置换型 DNA 聚 早在 20 世纪 90 年代初, 就出现了关于恒温核酸