玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌.docVIP

玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌 一、目的要求 掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。 二、实验材料 玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳 三、操作步骤 （一）清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。1. 新玻璃器皿的洗涤方法 新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。 2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有一层微小粒子，故要用水多次甚至10次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或025%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。然后在稀洗涤液中浸泡05—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。 3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液 重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液 重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。贮存于有盖容器内。(2)原理 重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸，酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。(3)使用注意事项 (a)洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用，玻璃器皿浸泡时间太长，会使玻璃变质，因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。其次，洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗，再用苏打水或氨液洗。如果溅在桌椅上，应立即用水洗去或湿布抹去；(b)玻璃器皿投入前，应尽量干燥，避免洗涤液稀释；(c)此液的使用仅限于玻璃和瓷质器皿，不适用于金属和塑料器皿；(d)有大量有机质的器皿应先行擦洗，然后再用洗涤液，这是因为有机质过多，会加快洗涤液失效，此外，洗涤液虽为很强的去污剂，但也不是所有的污迹都可清除；(e)盛洗涤液的容器应始终加盖，以防氧化变质；(f)洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。 （二）空玻璃器皿的包扎 培养皿的包扎 培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5—8套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多于8套不易操作。 吸管的包扎 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5 cm处，塞一小段约1.5 cm长的棉花，以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的近左端，与报纸约呈45度角，并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打一小结。如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好，进行干热灭菌。 试管和三角烧瓶等的包扎试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞，然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸(不可用油纸)与细线包扎好，进行干热灭菌。试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中，用大张报纸将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若需湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好再加一层牛皮纸。 （三）干热灭菌法适用于玻璃器皿，如试管、培养皿、三角瓶、移液管等的灭菌； 装入待灭菌物品 预先将各种器皿用纸包好或装入金属制的培养皿筒、移液管筒内，然后放入电热烘箱中。 升温 关好电烘箱门，打开电源开关，旋功恒温调节器至所需温度刻度(本实验所需为160—170℃)，此时烘箱红灯亮，表明烘箱已开始加热，当温度上升至所设定温度后，则烘箱绿灯亮，表示巳停止加温。 恒温 当温度升到所需温度后，维持此温度2 h。 降温 切断电源，自然降温。 取出灭菌物品 待电烘箱内温度降到70℃以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。 常用培养基的配制和湿热灭菌 一、目的要求 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。 二、实验材料 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、1mol/L H Cl、K2H