一株抗植物致病真菌的深海霉菌的鉴定和活性成分理化性质分析.pdfVIP

第32卷第3期 应用海洋学学报 V01．32．No．3 2013年8月 JOurnaIOfApp¨edOceanography Aug．，2013 一株抗植物致病真菌的深海霉菌的 鉴定和活性成分理化性质分析 陈丽维，敖敬群，陈新华 (国家海洋局第三海洋研究所、国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室，福建厦门361005) 摘要：从印度洋深海底泥中分离到一株真菌s2915，经ITS基因序列分析及显微形态观察，鉴定 s2915为支顶孢属4cre啪凡iMmsp．真菌．其发酵液对5株植物致病真菌有明显的抑制作用．经硫酸 铵沉淀后的抗菌活性分析，可以初步判断该抗茵活性成分为蛋白类物质，且最佳硫酸铵饱和浓度为 70％(m／m)．初步分析了该抗茵粗蛋白的理化性质，结果表明，该活性物质具有很好的耐热性，经 受影响；紫外照射0—12h及用蛋白酶K、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶处理后，活性均没有减弱；但对多种 有机溶剂比较敏感，经三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚和丙酮处理后，抗菌活性受到不同程度的抑制，其 抑制率分别为35％、25．7％、22．9％、12．9％．证明该抗茵活性物质高效、稳定，可用于抗真菌农药 的开发应用． 关键词：海洋生物学；支顶孢属；植物致病真菌；硫酸铵沉淀；抗茵活性 DOI：10．3969／J．ISSN2013．03．012 中图分类号：P735 文献标识码：A 随着人口的增长，农用土地越来越稀少，控制植 微生物和植物生长息息相关，微生物来源的抗 物病虫害对增加农产品的输出显得越为重要。1一．其 真菌蛋白在植物防御中起着关键作用∞J．如生防芽 中真菌病害是植物病害里最重要的一类，约占植物 孢杆菌具有发达的分泌系统，能够产生多种非核糖 病害的70％～80％．在世界范围内，由于真菌致病体合成小分子抗菌肽及大量的抗菌蛋白o．真菌中 菌造成的主要粮食和经济作物减产达到了20％。2。． 除以青霉属和曲霉属产生的抗菌肽外，研究还发现 为避免这些损失，使用抗真菌农药成了必不可少的 植物内生真菌发酵液中也存在多种抗植物致病真菌 手段． 的活性肽类物质哺1． 相对于化学合成农药，抗真菌蛋白因抗菌谱广 本研究从印度洋深海底泥中筛选出一株对多种 且对耐药菌株具有良好的杀菌作用，从巨多抗真菌 植物致病真菌有较强拮抗作用的真菌，通过分子鉴 药物中脱颖而出．抗真菌蛋白来源广泛，哺乳动物、 定和形态学特征观察确定了其种属．通过硫酸铵沉 昆虫、两栖动物、细菌和真菌及植物都可视为来 淀后的活性检测，初步确定抗菌活性成分为蛋白类 源[3]．目前已从中分离到多种抗菌蛋白，包括PR一蛋物质．并初步分析了该抗菌蛋白的理化性质，为后续 白、类甜蛋白、葡聚糖酶、蛋白酶抑制剂、核糖体失活 抗菌活性成分的分离纯化提供了依据． 蛋白、几丁质酶、类几丁质蛋白、类亲环蛋白、非特殊 脂转移蛋白和富含甘氨酸／组氨酸蛋白‘4o．PR一蛋白 1材料和方法 是植物受到病原微生物侵染时高度表达的一种防御 1．1 指示茵 蛋白复合体，目前已从不同的植物及组织中分离到 本实验所用的指示真菌主要包括：宛氏拟青霉 多种具有抗菌活性的蛋白p一． 收稿日期：2012一12一17 基金项目：国家海洋公益项目资助项目(201205020，2叭005032) 作者简介：陈丽维(1987一)，女，硕士研究生；E．nlail：livel097@163．com 通讯作者：陈新华，男，研究员；E—mai：chenxinh@tom．c()m 万方数据 3期 陈丽维，等：一株抗植物致病真菌的深海霉菌的鉴定和活性成分理化性质分析 ·39l·