中药多糖的提取分离工艺研究.docVIP

多糖是由单糖连接而成的多聚物，人们对多糖的研究已经有很长时间的历史，对多糖的初始研究可追溯到1936年Shear对多糖抗肿瘤活性的发现，至20世纪50年代，陆续发现一些真菌多糖和高等植物多糖具有明显的抑瘤活性。最近又发现许多中药多糖还具有降血糖作用。70年代以来，科学家们发现多糖及糖复合物在生物体内不仅是作为能量资源和构成材料，重要的是它存在于一切细胞膜结构中，参与生命现象中细胞的各种活动。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，广泛存在于动物、植物、和微生物细胞壁中，是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子。科学研究已经确认糖类物质具有许多生物活性，包括抗肿瘤、免疫、降血糖和抗病毒等，而且对机体几乎无毒副作用。中药多糖因具有增强机体免疫功能及抗肿瘤降血糖等药理作用，而且几乎没有毒性与副作用，因此引起国内外药理学家、生物学家和化学家们的关注。 　　1.多糖的提取工艺 　　1.1 水提法 　　用水作溶剂来提取多糖是最常用的方法之一，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。水提取的多糖多数是中性多糖。一般植物多糖提取多数采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去不溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，用高浓度乙醇沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。 　　用100g去核枣粉，加入250mL适当体积分数的乙醇，45水浴回流脱脂两次，离心分离后枣渣加水共3500mL，90水浴搅拌浸提8h，离心分离，合并所得多糖提取液；提取液45减压浓缩，浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，得粗多糖沉淀；粗多糖加水溶解后，氯仿、正丁醇脱蛋白，用NaOH溶液调pH值至弱碱性，加0.4倍多糖液体积的H2O2，40水浴保温4h脱色；脱色液对蒸馏水透析24h，无水乙醇沉淀，离心分离，45真空干燥，得到大枣多糖。根据预实验，选择对水冷浸提取工艺有影响的主要因素：加水量、提取时间、提取次数及是否搅拌，按L9（34）进行正交试验。按常规，将中药的水冷浸条件设为中间水平，分别再取高低两水平。最后得出枸杞多糖的最佳提取工艺为：取枸杞药材，第一次加水l0倍，以后每次加水8倍量，共冷浸3次；每次冷浸1h；每小时搅拌10min.溶剂提取为常用的传统方法之一，有自身的优点。如不需特殊设备，成本低等，但此法往往提取效率低且费时，因此，近年来，伴随着现代工业工程技术的迅猛发展，一些现代高新技术不断被应用到植物多糖的提取中。 　　1.2 酸提法 　　有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。将热水浸提过的阿魏侧耳子实体残渣加8倍量的3%的三氯乙酸浸提，15过夜，过滤，离心，将提取液用20%的NaOH中和至pH为7，浓缩、醇析沉淀、丙酮洗涤、真空冷冻干燥得酸提水溶性粗多糖PFA.从对海蒿子多糖的提取方法研究发现，从硫酸根含量及粗多糖产率看，酸提方法优于水提方法。 　　其具体酸提方法如下：取100g海蒿子干粉，加入1000ml0.1mol/LHCl溶液提取，室温搅拌1h后过滤，重复操作三遍，合并滤液滤液减压浓缩至总体积的1/5，再加入95%乙醇至乙醇浓度达30%，沉淀，离心除去沉淀中的褐藻酸。继续向上清液中加入乙醇至乙醇浓度达70%，室温放置过夜使沉淀完全，离心，沉淀干燥得海蒿子粗多糖C2.多次试验算得平均产率为3.35%.在茜草多糖提取研究中，发现相对于水提，以稀酸提取茜草多糖，产品纯度较高。具体方法如下：茜草根粗粉1000g，5%HC1浸泡，离心，取上清液加入EtOH并调节至浓度为70%，静置，2500rpm离心，收集棕色沉淀物，95%EtOH洗涤3次，以4%HCl溶解，加1%活性炭脱色，真空抽滤，滤液过夜，弃去容器底部少许沉淀物，溶液置透析袋内，逆水法透析3日，冷冻干燥，得白色粉末约10g（多糖A）。酸提法有其特殊性，只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。 　　1.3 碱提法 　　与酸提类似，有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用稀碱提取：多为0.1mol/L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。HayashiKatsuhiko发明了从绿色藻类中提取酸性多糖的方法，而种多糖用常规的热水法是无法得到的。具体过程为：将干燥的绿藻粉末制成浮液，热水浸泡提取或将含水绿藻直接用热水提取后离心分离，取黏稠的固状物，加入碱水，在pH3.0的条件下再行搅拌提取，碱水提取液在搅拌的同时加入酸水调节pH值至3～4，静置沉