光学、色谱分析化学问答题.docVIP

各类基本类型色谱的分离原理有何异同？ 1）分配色谱法：利用被分离组分在固定相或（和）流动相中的溶解度差别，即分配系数的差别而实现分离。包括气液分配色谱法和液液分配色谱法。（2）吸附色谱法：利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差别，即吸附系数的差别而实现分离。包括气固吸附色谱法和液固吸附色谱法。　　在硅胶液固吸附色谱中，极性强的组分吸附力强。常见化合物的吸附能力有下列顺序：烷烃＜烯烃＜卤代烃＜醚＜硝基化合物＜叔胺＜酯＜酮＜醛＜酰胺＜醇＜酚＜伯胺＜羧酸。（3）离子交换色谱法：利用被分离组分离子交换能力的差别即选择性系数的差别而实现分离。按可交换离子的电荷符号又可分为阳离子交换色谱法和阴离子交换色谱法。（4）分子排阻色谱法：根据被分离组分分子的线团尺寸，即渗透系数的差别而进行分离。 说明保留因子的物理含义及与分配系数的关系。为什么保留因子 (或分配系数) 不等是分离的前提？ 分配系数K：在一定温度和压力下，达到分配平衡时，组分在固定相与流动相中的浓度之比。保留因子k：在一定温度和压力下，达到分配平衡时，组分在固定相和流动相中的质量之比。分配系数K，容量因子k与保留时间之间有如下关系：k＝＝＝K＝，tR＝k t0。上式说明容量因子的物理意义：表示一个组分在固定相中停留的时间（tR）是不保留组分保留时间（t0）的几倍。k＝0时，化合物全部存在于流动相中，在固定相中不保留，tR＝0；k越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间越长。　　色谱过程是组分的分子在流动相和固定相间多次分配的过程。若两组分的分配系数存在微小的差异，经过反复多次的分配平衡，使微小的差异积累起来，其结果就使分配系数小的组分被先洗脱，从而使两组分得到分离。色谱分离的前提是分配系数或保留因子不等。 要引进定量校正因子的原因：检测器对相同质量的不同物质检测后，产生的峰面积不相等，不能直接用峰面积计算。 常用的定量方法：(1)归一化法 当试样中所有组分都能流出色谱柱并在色谱图上显示色谱法。(2)内标法 当试样有组分不能流出色谱柱或检测器无响应，或只需测定试样中一个或几个组分时，可采用内标法定量。(3)外标法 又称标准曲线法。将待测组分的标准品配成一系列不同浓度标准溶液，在选定的色谱条件下分离，测出峰面积，作峰面积和浓度的标准曲线。然后在相同色谱条件下，取同样量的试样进行分离，测出峰面积，在标准曲线上查出被测组分的含量。 外标法操作和计算都简便，不必用校正因子。但进样量等操作条件要求稳定。适用于大批量试样分析。 简述高效液相色谱法和气相色谱法的主要异同点。 解：二者都是根据样品组方与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。 从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器，氢焰检测器和火焰检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器，荧光检测器及电化学检测器等。但是二者均可与MS等联用。 二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快、操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。而只要试样能够制成溶液，既可用于HPL分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。 1．哪些因素会影响荧光波长和强度？ 温度 酸度 荧光熄灭剂 散射光 2. 何谓荧光效率？具有哪些分子结构的物质有较高的荧光效率？ 荧光物质的量子效率定义为出射荧光光子数和入射光光子数的比。 3. 红外吸收光谱法与紫外可见吸收光谱法有何不同？ 紫外-可见吸收光谱：让不同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波长光的吸收程度(吸光度A)，以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸收光谱或吸收曲线，即为紫外—可见吸收光谱。　　红外光谱：又称为分子振动转动光谱，属分子吸收光谱。样品受到频率连续变化的红外光照射时，分子吸收其中一些频率的辐射，分子振动或转动引起偶极矩的净变化，使振-转能级从基态跃迁到激发态，相应于这些区域的透射光强减弱，记录百分透过率T%对波数或波长的曲线，即为红外光谱。　　区别--起源不同　1.紫外吸收光谱由电子能级跃迁引起紫外线波长短、频率高、光子能量大，能引起分子外层电子的能级跃迁。电子跃迁虽然伴随着振动及转动能级跃迁，但因后者能级差小，常被紫外曲线所淹没。除某些化合物蒸气(如苯等)的紫外吸收光谱会显现振动能级跃起迁外，一般不显现。因此，紫外吸收光谱属电子光谱。光谱简单。2.中红外吸收光谱由振—转能级跃迁引起? 红外线的波长比紫外线长，光子能量比紫外线小得多，只能收起分子的振动能级并伴随转动能级的跃迁，因而中红外光谱是振动—转动光谱，光谱复杂。 当一定频率的红外光照射物质时，如果分