生物工艺原理（ 第二版） 教学课件 作者 贺小贤 主编 课件 工艺原理（ 第十一章）.ppt

尚辅网 尚辅网 第十一章 动植物细胞培养 动植物细胞培养： 指动植物细胞在体外条件下的存活或生长,此时细胞不再形成组织. 第一节 动物细胞培养 一 、动物细胞的培养特点（一） 往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子等，其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10％的胎牛或新生牛血清。 动物细胞的培养特点 (二) 不仅需要严格的防污染措施，同时还要用空气、氧、二氧化碳和氮的混合气体进行供氧和调节pH。 动物细胞的培养特点 (三) 原代培养是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞后开始的培养。 转移一部分初代培养物到新鲜培养基中的培养，叫做传代培养或再培养。 动物细胞的培养特点 （四） 但也有一些细胞，如淋巴细胞，能够在悬浮状态生长，细胞悬浮培养具有多方面的优越性，易于大规模生产，便于过程的控制。  游离期： 细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。 10分钟一4小时 水：新鲜配置的三蒸水或去离子水 平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液 PBS：NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4.H2O 1.56 g KH2PO4 0.20 加水至1000 ml 胰酶（Trypsin）溶液 和EDTA 溶液 胶原酶（collagenase）溶液 四、培养基 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。 天然培养基： 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 营养成分丰富，培养效果好 来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染 合成培养基: 目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 标准化生产，组分和含量相对固定。成本低 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 无血清培养基 在基础培养基中补充各种必需因子，如激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子 等。 基础培养基 无血清培养基 替代血清的补充成分组成。 五、抗菌素的使用： 在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。 青霉素和链霉素联合使用。培养基内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。 庆大霉素：每毫升100单位——方便、广谱、稳定 六、培养技术 　　动物细胞大规模培养与实验室培养相比,培养条件更严格,控制难度更大,其培养方法可概括为:　　　　　　 　　　　　悬浮培养　　　固定化培养　　　微载体(Microcarrier)培养法  （１）细胞悬浮培养法 　　　　动物细胞在培养液中呈悬浮状态生长繁殖的培养方法谓之悬浮培养法。 其培养方式：　　　 　 批量法