仪器分析教程 教学课件 作者 陈集朱鹏飞 主编 第10章 高效液相色谱法－仪分教程 10.6 高效毛细管电泳.pptVIP

尚辅网 尚辅网 仪器分析教程 10.6 高效毛细管电泳 电泳：带电粒子在外电场的作用下，向与其所带电荷相反的电极迁移的现象。速度ν电泳 电渗流现象：玻璃表面存在硅羟基, pH3时, 形成双电层，在高电场的作用下引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν电渗流。 10.6 高效毛细管电泳 2.高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6.1 HPCE的装置 10.6 高效毛细管电泳 10.6.1 HPCE的装置 10.6 高效毛细管电泳 10.6.1 HPCE的装置 高效毛细管电泳仪器（1） 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 10.6 高效毛细管电泳 上一内容 下一内容 回主目录 返回 * 尚辅网 第10章 高效液相色谱法 10.6 高效毛细管电泳 High Performance Liquid Chromatography （HPLC) 10.6.1 HPCE的装置 10.6.2 HPCE的分离原理 10.6.3 HPCE的特点 10.6.4 HPCE的分离模式 尚辅网 尚辅网 1.经典电泳分离法 电泳法：利用电泳现象对物质进行分离分析的方法。所用分离柱的柱径大，柱较短，分离效率不高（远低于HPLC），温度影响大。 尚辅网 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管； 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加， 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 10.6 高效毛细管电泳 尚辅网 HPCE的基本装置为：高压电源、毛细管柱、进样系统、检测器、两个贮液器和控制及数据处理系统。其仪器装置下图所示。 尚辅网 1.高压电源 一般为30kV，电流为200～300μA，稳定、连续可调的直 流电源，具有恒压、恒流和恒功率输出。 2.毛细管柱 柱长度一般为10～100cm、内径为25～100μm，最常用的是 50μm。常用的毛细管为用高纯石英拉制的圆柱形毛细管。 尚辅网 3.进样系统 nL级进样 （1）压差法进样 靠虹吸作用将试样吸入 （2）电动进样 简单，易于实现自动化 4.检测器 紫外或激光诱导荧光检测器（可检测到：10-19～10-21mol·L -1） 尚辅网 10.6 高效毛细管电泳 尚辅网 高效毛细管电泳仪器（2） 尚辅网 高效毛细管电泳仪器（3） 尚辅网 10.6.2 分离原理 电场作用下，柱中出现电泳现象和电渗流现象。 带电粒子的迁移速度等于电泳和电渗流两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子：无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反，ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最 后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由 于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。 尚辅网 10.6.3 毛细管电泳的特点 高灵敏度：可检测出低至10-21 mol/L浓度的物质。 高分离效率：理论塔板数高达数百万块，甚至数千万块。 高分析速度：可在3分钟内分离30种阴离子；1.7分钟分离19种阳离子;4分钟内将碱金属和镧系元素的24种阳离子完全分离。 试样用量少：仅需几nL（10-9 L）的试样 仪器简单，操作成本低：分析一个试样仅需几毫升流动液。 尚辅网 10.6.3 毛细管电泳的特点 不足之处： 进样不够方便。应用范围相对较窄。 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。 尚辅网 10.6.4 毛细管电泳的特点分离模式 按照毛细管内的分离介质和分离原理的不同，HPCE目前有以下6种主要的分离模式。 1.毛细管区带电泳（CZE） 最普遍、最基本的一种分离模式。 CZE分离是基于各组分的净电荷与其质量比（荷质比）的 差异而实现的，其分离介质通常为电解质水溶液， 主要应用于氨基酸、肽、蛋白质、多种离子和带电粒子的 分离分析，还可用于对映