细菌总RNA提取方法的比较_邹晓蕾.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2013, Vol.29, No.8 细菌总RNA提取方法的比较 邹晓蕾，刘礼崔，罗立新 （华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006） 摘要：采用改良前后的 Trizol 法，RNAiso plus 法、Qiagen 试剂盒法以及 Triton X-100 法，从大肠杆菌（Escherichiacoli ），枯草 芽孢杆菌（Bacillus subtilis ），乳酸乳球菌（Lactococcuslactis ）3 株细菌中提取 RNA。用琼脂糖凝胶电泳和核酸浓度测定仪检测总RNA 的提取质量，并用RT-PCR （Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction ）对RNA 的质量进行验证。结果表明：RNAiso plus 法对 3 株菌的总 RNA 提取均有很好的效果。Trizol 法和Qiagen 试剂盒法对于E. coli 总RNA 的提取效果不错，但对其他2 株菌的提取效 果均不明显，并且都伴有DNA 污染。上述几种方法提取出的RNA 样品中均含有 23S 和 16S rRNA。L.lactis 更适合用Triton X-100 法 提取总 RNA。改良后的Trizol 法和RNAiso plus 法与Triton X-100 法的原理基本相同，都是采用加热的方法，更彻底地裂解细菌细胞， 而且得到的RNA 中不含有rRNA 和 tRNA ，只保留了mRNA ，能更好地用于后续的实验研究。 关键词：细菌；总RNA 提取；反转录聚合酶链式反应 文章篇号：1673-9078(2013)8-1948-1954 Comparison of Different Methods for Total Bacteria RNA extraction ZOU Xiao-lei, LIU Li-cui, LUO Li-xin (College of Bioscience Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006) Abstract: In this research, RNA was isolated from three bacterial strains, (Escherichia coli, Bacillus subtilis and Lactococcuslactis) by using modified and un-modified Trizol and RNAiso plus methods, Triton X-100 method and Qiagen method. The quality and integrity of the extracted RNA samples were determined with agarose gel electrophoresis, nucleic acid detector and RT-PCR detection. The results demonstrate that un-modified RNAiso plus method can effectively collect high-quality RNA from the three bacterial strains. Qiagen method and un-modified Trizol method showed good efficiency when isolating total RNA from E.coli but other strains. In addition, the RNA samples also contain DNA contamination. L. lactis was more suitable for using Triton X-100 method. With th