软脉灵口服液对动脉粥样硬化斑块内血管新生作用研究.pdfVIP

中华中医药学会血栓病分会第七次学术研讨会·实验研究 软脉灵口服液对动脉粥样硬化斑块内 血管新生的作用研究 吴天敏陈金水曾细阳 (福建医科大学附属第一医院，福建福州 350005) 摘要：目的：观察软脉灵口服液对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的影响，探 讨其稳定斑块的机制。方法：30只6—8周龄ApoE基因敲除小鼠，饲以高脂饲料12周后，随机分为3 组：模型组、软脉灵组、辛伐他汀组；另设6只正常c57BL／6J小鼠作为对照组。分别给药12周后 内微血管密度(MvD)及小鼠主动脉cDl05表达。结果：与模型组比较软脉灵组、辛伐他汀组Tc、 灵口服液可能通过降低斑块内cDl05蛋白表达，抑制血管新生，达到稳定动脉粥样硬化斑块目的。 关键词：动脉粥样硬化斑块软脉灵口服液ApoE基因敲除小鼠新生血管cDl05 国内外医学界对As关注程度日益增长。但是As本身并不足以致命，而是随着As的发展，斑块破裂及 继发血栓形成，导致急性冠脉综合征。有研究发现，在发生斑块破裂、管壁出血或不稳定心绞痛的患者， 样硬化病理过程中的作用越来越受到重视。抑制粥样斑块内的血管新生正成为抗动脉粥样硬化治疗的 一个新方向。 临床研究表明软脉灵口服液对冠心病心绞痛有较显著的疗效，并能有效改善生化指标，具抗动脉 粥样硬化，治疗高脂血症等作用。纠’。为探讨软脉灵口服液稳定斑块的机理，本实验拟建立实验动物 模型，用免疫组化法测定斑块内新生血管的标志物cDl05的表达及微血管密度，探讨其改善As疾病进 程及稳定斑块的可能机制。 1材料与方法 1．1材料 自福州迈新生物科技有限公司。高脂饲料配制以胆固醇2．0％、猪胆盐2．5％、猪油lO．0％加入小鼠标准 饲料中，饲料经充分混匀后由福建福州吴氏动物实验中心加工成颗粒。 1．2模型的建立及动物分组 ApoE基因敲除小鼠，5只1笼饲养于福建医科大学附属第一医院动物实验室内。经普通饲料适应 各12小时的饲养室内，自来水随机取食。小鼠随机分3组：模型组、软脉灵组、辛伐他汀组，每组10只， 中华中医药学会血栓病分会第七次学术研讨会·实验研究 同时选取相同遗传背景的8周龄正常c57BL／6J雄性小鼠6只，作为对照组。 中每半个月称重体重无显著变化(PO．05)，故实验过程中药物剂量不做调整。 l_3标本获取与处理 药物干预12周末，禁食12小时，小鼠眼眶静脉采血，经2500rpm，离心10分钟后，取上清液， 保存在一20℃冰箱中，用于检测小鼠血脂水平。小鼠眼眶静脉采血后即剖腹开胸，从主动脉根部开始 将小鼠主动脉剥离取出，标本经10％多聚甲醛固定、石蜡包埋后切片，用于fIE染色光镜下观察主动脉 病理变化及免疫组化检查。 1．4免疫组化法测定以cDl05标记的微血管密度及其蛋白表达 1．4．1微血管密度结果判定方法 参照weidner哺。等报道的方法计数微血管密度。凡是染成棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞簇均作 为～个血管计数，凡管腔大于8个红细胞大小带有较厚肌层的血管区域的血管均不计数．先用低倍镜 选取5个血管密度高的区域，判断cDl05阳性细胞(染成棕色的内皮细胞)，以确定血管密度最高的区域， 再用高倍镜下(x200)观察，镜下孤立的内皮细胞或细胞丛作为1个血管计数，记录5个视野内的微血 管数，取其均数为微血管密度(^l、J_D)值。微血管的计数标准：(1)单个阳性染色的血管内皮细胞：(2) 一个阳性染色的血管内皮细胞簇：(3)血管干上的分枝结构。 1．4．2 CDl05蛋白表达 各组5个标本各1张切片，在200倍视野下随机选择背景和阳性组织区域合5处，表达结果利用 免疫组化定量分析软件IPP6．0分析，用积分光密度值(inte—gral opticdensityIoD)表示其表达 强度，OD值越大表达越强。 1．5统计学方法 所有数据采用sPssl3．O统计软件统计，计量资料以平均数士标准差(叉±s)表示，多组间比较 采用方差分析，PO．05表示有统计学差异，P0．01表示差异显著，PO．05表示差异无统计学意义。 2．结果 2．1小鼠一般情况 各组小鼠