气相色谱法同时检测吸附百白破疫苗与相关制品中残留溶剂-甲苯、三氯甲烷的研究.pdfVIP

气相色谱法同时检测吸附百白破疫苗及相关制品中 残留溶剂一甲苯、三氯甲烷的研究 方舸，钱 刚，连亚光，杨燕珠，李金屏 (武汉生物制品研究所质量保证部生化室，武汉430060) 摘要：目的建立用于同时检测吸附百白破疫苗及相关生物制品中的残留溶剂甲苯、三氯甲烷的毛细管气相色 谱法。方法采用HP-5色谱柱，设置进样13温度：200。C、检测器温度：250℃、柱温：40℃、进样体积：1“、分流比：10 ：1，通过优化确定色谱载气(氮气)流速：1ml／min，进行定位，确定最低检出限和定量限，进行线性试验，重复性试 验，准确性(加样回收)试验及样品测定。结果本色谱条件下，三氯甲烷、甲苯分离效果良好；检出限分别为 0．50e／ml、0．38彬“；重复性好；线性关系良好，相关系数均达到0．9995以上；平均回收率分别为102．9％、 101．O％。结论本方法适合同时检测吸附百白破疫苗等生物制品中的残留溶剂甲苯、三氯甲烷。 关键词：甲苯；三氯甲烷；气相色谱；残留溶剂 在吸附百白破疫苗，吸附无细胞百白破疫苗，吸 4样品溶液的制备 附破伤风疫苗，破伤风抗毒素等生物制品的生产工 吸附百白破疫苗、吸附白破二联疫苗、吸附破伤 艺中加入了极少量的甲苯或(和)三氯甲烷。甲苯 风疫苗、吸附无细胞百自破疫苗：均各取3支混合均 和三氯甲烷属于二类溶剂¨‘21，过量对人体健康造 匀，精密量取2ml，精密加无水乙醇2ml，混匀，离心 成危害，因此SFDA要求对生物制品中的甲苯和三 取滤液上机。 氯甲烷进行限度检测。但中国药典》(2005版)三 部未收载相关检测方法，而《中国药典》(2005版) 破伤风抗毒素、抗狂犬血清：均各取3支混合均 二部仅有残留溶剂检测方法通则，没有针对各制品 匀，精密量取2ml，精密加无水乙醇2ml，混匀，放置 的具体检测方法，本文根据武汉生物研究所现有条 件，建立了用于同时检测吸附百白破疫苗及相关生 物制品中残留溶剂甲苯、三氯甲烷的毛细管气相色 谱法。 上机。 5对照品溶液的配制 材料与方法 分别取适量甲苯、三氯甲烷，精密称定，置50ml 1 仪器 量瓶中，加少量乙醇溶解后，加50％乙醇至刻度，摇 7890A气相色谱仪，配FID检测器(氢匀。临用前用0．45pan滤膜滤过，取滤液上机。 Agilent 6 载气(氮气)流速的优化 火焰离子检测器)；HP-5(5％苯基-95％甲基聚硅氧 X0．32ramX 烷，30m 0．25tun)色谱柱。均购自Agi— lent公司。 0．32mm×0．25岬)色谱柱，设置进样口温度： 2试剂 2000C；检测器温度：250℃；柱温：40℃【31；氢气流量： 40 三氯甲烷(色谱纯)，国药集团化学试剂有限公 ml／min；空气流量：400ml／min；进样体积：1“，分 司生产；无水乙醇(色谱纯)，甲苯(色谱纯)，均由天 津科密欧化学试剂有限公司生产。 载气(氮气)流速对溶剂乙醇与三氯甲烷及样品分 3样品 离度的影响，从而确定最佳流速。 吸附百白破疫苗，吸附无细胞百白破疫苗，吸附 7 专属性试验(空白溶剂)及三氯甲烷和甲苯定位 白破二联疫苗，吸附破伤风疫苗，破伤风抗毒素，抗 分别将50％乙醇溶剂，一定浓度的三氯甲烷、 狂犬血清等均由武汉生物制品研究所生产。 甲苯对照溶液按已确定的色谱条件进行检测，