采用图像分析技术测定黑素细胞中黑素含量.pdfVIP

维普资讯 第 32卷第 3期 日用 化 学 工 业 ChinaSurfarlantn№ r眢巳Ht＆Cosmetics Vo1．32No．3 姗 年 6月 June舢 采用图像分析技术测定黑素细胞中黑素含量 宋琦如 ，沈光祖 ，金锡鹏 复旦土学两随医学研究断皮肤生理毒理实验室，上淘 200o32) 摘要：采用图像分析技术，建立丁细胞中黑素含量的测定方法，以适应美白化妆品研究开发的需要。结果 显示：改进后的方法，精确度测试的变异系数均值为 1．2％；准确度测试，相关系数为091054；稳定性测 试 ，方差分析无显著性差异。提示本法精确、准确 、稳定、简便和经济，适用于美白化学物的研究开发。 关键词：化妆品；图f象分析；黑素细胞 ；黑素含量 中图分类号：1o658 文献标识谒 ：A 文章编号：1001—1803(2002)03—0061—02 检测黑素细胞中黑素含量是美 白化合物功效评价 待黑素细胞树突收缩，细胞呈圆形状，用含小牛血清 的最基本、最终指标．无论该美 白化合物是抑制酪氨 的MCDB153培养液终止消化，离心后精确计数细胞， 酸酶活性，或者阻断信号传导途径，还是通过其他途 接种于放置有 22nllTl×22I11／11盖玻片的直径 3．5cm培 径作用，其美 自效果的最终评判要以黑素细胞中黑素 养皿中，置于 37℃培养箱中，24h后换液，同时按 含量是否降低为准则。目前在美 白化合物效果评价 低剂量组 (10sg／mL)、中剂量组 (50t~g／mL)和高 中，采用的细胞中黑素含量测定方法是生物化学方 剂量组 (1oot,g／mL)，分别加入受试物 (Vc)。不断 法，该方法对细胞数量、环境温度和测定时间等因素 观察细胞，并隔天换液，于第 5天终止实验，将长有 要求高，操作步骤 比较复杂．如果样本量较多时，被 黑素细胞的盖玻片用 10％中性福尔马林缓冲液固定 测试细胞在等待过程中会出现死亡，如果死亡细胞数 60rain。水洗后置于 5molHCI中水解60min(室温)， 量过多，就会影响测试结果的准确性 图像分析技 经蒸馏水冲洗后移人CASFeulgeaa试剂中浸泡60min， 术 。是根据特殊染色组织的像素点多少进行定量，在 Rinse液中逐级洗脱 30min、5min、10min，流水冲洗 这个过程 中，细胞经 l0％福尔马林缓冲溶液固定， 5min后，常规脱水，透明、中性树脂封片，4℃冰 不存在细胞死亡问题，数据的采集和处理均由计算机 箱保存待检。 进行，减少了误差，可 以保证结果的正确性、可靠 测定仪器采用 CIAS一1图像分析系统，图像分析 性 我们根据实验的要求，并结合图像分析技术的特 采用华东理工大学 自动化所编制的图像分析系统免疫 点，将图像分析技术引入到美白化合物的研究中，以 组化定量软件进行。其原理为：显微镜为40倍物镜 期为美白化合物功效评价方法注入新的内容 时，显微摄像镜头下的测试面积为 261ID0像素 1 材料与方法 (pixe1)，实际尺寸为 10000／tm2。当被测组织经特殊 1．1 试剂 染色呈现一定颜色时，测定系统根据一定面积下该颜 MCDB153培养基：美 国Sigraa公司；胎牛血清： 色像素点的多少对被测组织进行定量。 美国Gitsso公司；Pmase：华美公司：福尔马林：上海