动物组织中核酸的提取与分离实验方案.pptVIP

动物组织中核酸的提取与分离 生药1011 王琼 实验目的 实验原理 实验材料与仪器 实验步骤 一、实验目的 学习离心技术、掌握离心机的使用方法。 了解本实验的设计思路 三、实验材料与仪器 1、材料 猪肝、2%三氯醋酸、95%乙醇、5%硫酸、浓氨水、钼酸氨、3，5—二羟基甲苯、二苯胺、5%硝酸银、氨基萘酚磺酸 2、器材 离心机、离心管、玻璃棒、滤纸、小烧杯、水域加热炉、试管、沸水浴锅 四、实验步骤 1、制备匀液：称取猪肝置于研钵中加入细沙少许，充分研磨制备成匀液，加入等量的生理盐水。 2、分离抽提: 1)将猪肝匀浆倒入离心管内，立即加入2%三氯醋酸4ml，用玻璃棒搅拌然后静置3min，离心3500转每分钟，2分钟。 2）倾去上层酒精液，在沉淀中加入10%Nacl溶液4ml搅匀，再置于沸水中加热8min，并用玻璃棒不断搅拌，取出冷却后再离心（3000转每分钟，两分钟） 3）将上清液倒入小烧杯中，去等量的95%乙醇，逐步滴加小烧杯内边加边摇匀，即可见到白色沉淀逐渐出现，静置10分钟后，将小烧杯内容物倒入离心管，离心（3500转每分钟，2分钟） 4）倾去上清液即得到核酸钠的白色沉淀。在含核酸的离心管内加入5%硫酸4ml，用玻璃棒搅匀在沸水加热8分钟即可。 3、RNA和DNA的成分的鉴定 * * 二、实验原理 核酸包括两部分：核糖核酸（RNA）、脱氧核糖核酸（DNA）,广泛存在于生物细胞中，本实验室从动物肝组织分离提取RNA和DNA，用酸水解法使之水解产生基本组成成分，戊糖、磷酸、碱基，然后分离鉴定。动物组织中细胞中的RNA和DNA大部分与蛋白质上的之类杂质，然后用10%Nacl溶液提取的核酸的钠盐，再加入乙醇使核酸钠沉淀出。核酸钠微溶于冷水，不溶于乙醇，加热时和酸的钠盐形成清澈的溶液。RAN和RNA均可以硫酸水水解生成磷酸、嘌呤、与嘧啶碱和戊糖。 1）磷酸 磷钼酸 钼蓝 （显蓝色） 2）嘌呤碱 嘌呤银化合物（灰褐色、絮状） 3）脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 4）核糖 糖醛 蓝色复合物 钼酸铵 Vc 或 氨基萘酚磺酸 硝酸银 硫酸 二苯胺 硫酸 3，5-二羟基甲苯 匀浆器 离心机 *