载BRL细胞聚鸟氨酸微胶囊的制备与功能.pdfVIP

能 财 料 文章编号：1001—9731(2013)12—1804—04 载BRL细胞聚鸟氨酸微胶囊的制备与功能+ 刘源岗，白 燕，王士斌 (华侨大学化工学院，福建厦门361021) 摘要： 为了研究新型膜材聚鸟氨酸对微囊化细胞 为该新型膜材在微囊化细胞应用方面提供实验依据。 功能的影响，制备了包埋有BRL细胞的聚鸟氨酸一海 2 实 验 藻酸盐微胶囊并考察了微囊化肝细胞的生物学活性以 及细胞功能。结果表明，载BRL细胞的PLO微胶囊2．1材料与仪器 形态完整，表面光滑，细胞在PLO微胶囊内的三维立 体环境中能够维持活性，且具有维持分泌尿素和蛋白 质的功能，从而为该新型膜材在细胞微囊化的应用方 面提供了实验依据。 四川I新成生物科技有限责任公司；BCA蛋白质定量试 关键词： 聚鸟氨酸；BRL细胞系；微胶囊；细胞功能 剂盒，上海基星生物科技有限公司；BRL小鼠肝细胞 中图分类号：R318 文献标识码：A 株，购自中国科学院上海细胞库。25cm2细胞培养瓶， DOI：10．3969／j．issn．1001—9731．2013．12．029 BIOFI[。公司；高压微胶囊成型装置，上海理工大学研 1 引 言 WIDE 制；IX51倒置式显微镜，C一5060ZOOM数码照 MAX 细胞的微囊化是将细胞包封于膜材内形成球状微 相机，日本OLYMPUS公司；SPECTRA190酶 胶囊的一种技术[1]。该技术利用微囊内腔空间可容纳 标仪，美国MD公司；3110水套式CO。培养箱，美国 THERMO 细胞的特点，同时微囊膜可起到免疫隔离与保护作用， ELECTRON公司。 不影响营养物质和氧气的运输以及代谢物的排出，是 2．2 微囊化BRI。细胞的制备 一种较为理想的体外三维扩增培养模式，已广泛应用 对数生长期的细胞在进行微囊化前12至16h更 于细胞培养瞳]、细胞移植[3]、人工器官[4]、代谢物生换一次培养液。微囊化前用PBS冲洗，胰酶消化离心 产[50以及组织工程领域[6]。其中，基于阳离子型高聚后悬浮于过滤除菌的海藻酸钠溶液中，计数后调整细 物为膜材的海藻酸盐微胶囊，由于微胶囊内部能以凝 胞浓度为1×106个／mL。将制备好的细胞悬液通过 胶态或液态形式存在，适于细胞的包埋与生长繁殖，是 高压静电发生装置滴入1．5％(质量浓度)的CaCl。溶 最常用的细胞微囊化体系。常用的膜材主要包括聚赖 液中，形成包埋细胞的海藻酸液滴。然后再置入 氨酸和几丁聚糖，前期也研究了聚精氨酸在微胶囊中 的使用[7’8]。近年来，围绕新型膜材的研究获得了研究 0．15％的海藻酸钠溶液中，反应5rain，中和表面的正 者的关注，例如，Darrabie等[91研究发现，聚鸟氨酸膜电荷。再置入3％(质量浓度)的柠檬酸三钠中，反应 能够减小微胶囊的膨胀，提高机械强度；Tan等[1阳进6min，使微胶囊内的海藻酸钠凝胶液化。最后用生理 一步证实聚鸟氨酸能够减少免疫细胞的粘附，提高微 盐水清洗3次，将制备好的微囊化BRL细胞于37℃， 胶囊的生物相容性。因此，聚鸟氨酸作为一种潜在应 5％CO：孵箱中培养24h后即可用于实验。 用的膜材开始逐步受到研究者的亲睐。但是，目前关 2．3微囊化BRL细胞活性检测 于聚鸟氨酸膜材的研究较少，尤其是具