低剂量BPA对雌性大鼠与急性促心律失常作用及发生机制.pdf

IIlll l I II IIII IIII II III Y1 747086 摘要 摘要 研究背景与总体思路 1891年Aleksandr A， Dianin第一次人工合成了化合物双酚A(Bisphenol BPA)。从此揭丌了人类塑料工业的新篇章。BPA是聚碳酸酯塑料及树脂的主 要成分之一，五十年代以来，随着塑料业的快速发展，BPA越来越广泛地应用 于人类同常生活用品中，例如塑料婴儿奶瓶，饮料瓶，牙齿封闭剂及塑料食物 盒等，且人类对BPA的需求越来越高，其对人类环境的污染也F1益严重，从而 使得越来越多的人群接触BPA，大规模的人群调查研究发现95％以上的人群尿 液中能检测出BPA，其平均浓度为10母M左右。因此由于BPA的广泛污染而给 人类带来的影响也成为各个领域的研究者高度关注的话题。目前已证实BPA能． 模拟／手占抗雌激素的作用，而被认为是一种雌激素的内分泌干扰化合物。作为雌 激素的内分泌干扰化合物，BPA能结合雌激素受体(EstrogenReceptor，ER) c【和B。发挥由ER介导的急性反应。有研究发现BPA具有促肿瘤，糖尿病和 肥胖等发生发展作用，对机体的内分泌，生殖系统也能产生影响，而且认为人 体尿液中的BPA浓度与心血管事件之间有着一定的相关性。 根据目前的研究现状与结果，我们试图证实低剂量BPA在急性状态下对大 鼠单个心肌细胞及离体心脏可能具有促心律失常作用。且由于BPA为性激素内 分泌干扰物，因此其对雌雄性大鼠可能发挥着不同的作用。这一作用可能是通 过结合于细胞膜上的ER，快速激活相关的信号通道而实现的。此外，本研究 还试图探讨在心脏缺氧／再灌注损伤时，BPA对灌注后心律失常的影响。 为了证实这一推测。本研究方案如下： 首先，以体外分离的成年大鼠心室肌细胞为研究对象，以心肌细胞收缩率 为指标，观察BPA对不同性别大鼠心肌细胞的作用有何不同，同时在急性状态 系统和共聚焦显微镜等手段检测心肌细胞钙火花，钙瞬变，肌浆网钙负荷以及 相关指标的变化，并观察兰尼定受体阻断剂兰尼定是否影响BPA的作用，初步 1II 摘要 探讨BPA对单个心肌细胞的促心律失常作用及其是否具有性别特异性，并探讨 其发生的电生理作用机制。 其次，以ERl3基因敲除小鼠为实验模型，观察BPA对心肌细胞快速刺激 后产生after-transient的影响。同时检测ER0t和13兴奋剂对成年雌性大鼠心肌 细胞收缩率及after-transient的作用，并在给予BPA的同时给予ER 0【和阱占抗 剂，观察二者是否影响BPA的作用，从而试图解释ER的两个亚型Q和13如何 介导在BPA的急性促心律失常作用，初步探讨BPA的分子作用机制。 最后，以体外灌注的整体心脏作为研究对象，检测BPA对其心电图的作 用，同时观察缺氧／再灌注损伤时，BPA对缺氧／再灌注损伤室性心律失常及梗 死面积的影响，阐述BPA对离体整体心脏电生理的影响。从而以单个细胞结合 整体心脏，正常生理状态结合病理状念，全面地探讨低剂量BPA对雌性大鼠心 脏的促心律失常作用。 IV 摘要 第一部分：低剂量BPA对雌性大鼠心肌细胞的急性促心律失常作 用及其电生理机制 目的： 以体外分离的成年大鼠心肌细胞为研究对象，通过离子成像系统，共聚焦 显微镜及膜片钳等检测手段观察心肌细胞收缩率，心肌细胞钙火花，钙瞬变， 流等钙动力学相关指标的变化，初步探讨BPA促进单个心肌细胞心律失常发生 的电生理机制及其性别特异性。 方法： 雌雄性成年大