利用猪血制备氯化血红素及分析-毕业论文.docVIP

利用猪血制备氯化血红素及分析 重庆大学硕士学位论文 学生姓名：杨  娟 指导教师：李志良  教授(博导) 专  业：分析化学 学科门类：理  学 重庆大学化学化工学院 二 OO 八年四月 Analysis and Preparation of Hemin from Swinish Blood A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Degree of Master of Science by Yang Juan Supervisor: Prof. Dr. Li Zhiliang Major: Analytical Chemistry College of Chemistry and Chemical Engineering Chongqing University,Chongqing,China April, 2008 重庆大学硕士学位论文  摘  要  中文摘要 猪血是一种非常宝贵的生物资源，可以利用猪血提取多种生化产品，如氯化 血红素、凝血酶、白蛋白、超氧化物歧化酶(SOD)等产品，蕴藏着巨大的潜力和利 用价值。其中氯化血红素除了可用作食品中的色素添加剂，还是目前治疗缺铁性 贫血疗效较好的一种补铁剂，具有生物利用率高、无体内铁蓄积中毒及胃肠刺激 等不良反应的优点，同时还是抗贫血和抗肿瘤药物的重要原材料。从动物血液中 提取得到的血红素产品一般是氯化高铁血红素，本文分别研究了冰醋酸法、酸性 丙酮法、CMC-Na 法制备氯化血红素，对产品的产量、纯度、收率进行了分析，并 对产品进行了定性鉴定。最后对三种制备方法进行了横向、系统的对比研究，为 制备氯化血红素的工业生产提供了理论依据。 采集新鲜猪血，对猪血进行抗凝处理，分离红细胞和血浆。用 3.8% 的柠檬 酸钠溶液作为抗凝剂，抗凝时柠檬酸钠溶液与血液按体积比 1:9 混合。抗凝血在 3000 -4000r/min 的转速下离心分离，离心分离 10min,收集红细胞，用于制备氯化 血红素。 取 30mL 红细胞，用冰醋酸法制备氯化血红素，在冰醋酸法中，探讨了冰醋酸 添加量、反应温度、反应时间、氯化钠添加量对制备氯化血红素的影响，通过分 析对比氯化血红素标准品和样品的性状和紫外/可见光谱图，确定所得产品为氯化 血红素，经实验结果分析，得出最佳制备条件是冰醋酸添加量为血球的 4.5 倍， 反应温度确定为 105℃，反应时间为 35min，氯化钠的添加量为血球的 1.5% 时制 备得到的氯化血红素收率最高。按所得到的最佳工艺条件进行三次平行实验，氯 化血红素的收率和纯度平均可达到 38.12% 和 26.35%。 对酸性丙酮法制备氯化血红素的工艺进行了研究，通过单因子实验和正交实 验分别研究了加水量、超声波破碎时间、酸性丙酮加入量、pH 值、乙酸钠加入量 对制备氯化血红素的影响，结果表明制备氯化血红素的最佳条件是酸性丙酮加入 量为 150mL，pH 值确定为 4.8，乙酸钠加入量为滤液体积的 2% 时制备得到的氯 化血红素收率最高。在此条件下进行三次平行实验，氯化血红素的收率和纯度平 均可达到 44.88% 和 36.30%。 本文在前人实验的和预实验的基础上，确定了 CMC-Na 法中沉淀珠蛋白溶液 pH 值为 3.2，搅拌时间为 30min，CMC-Na 悬浮液浓度为 1.2%，提取搅拌时间为 50min，考查了 CMC-Na 加入量、吸附时间、pH 值三个因素对制备氯化血红素的 影响，实验结果表明，最佳工艺条件是 CMC-Na 加入量为 0.45g，吸附时间为 8h， pH 为 6.0 时制备得到的氯化血红素收率最高。按所得到的最佳工艺条件进行三次 I 重庆大学硕士学位论文  中文摘要 平行实验，所得氯化血红素的收率和纯度平均值分别为 56.05% 和 29.42%。由 CMC-Na 法制备所得氯化血红素产品不需要洗脱，性质稳定，可以久存，并且所 得产品可以直接制成口服液或压缩片，不影响其生物学效应，完全可以达到补铁 的效果，该法分离出来的血红蛋白无有机溶剂污染可再利用。 分别在对三种方法的工艺进行了系统研究的基础上，首先在感官下进行了对 比，以产量、纯度和收率为评价指标，比较了三种方法制备氯化血红素的效果， 几种方法制备得到的产物纯度大小依次是：酸性丙酮法〉CMC-Na 法〉冰醋酸法， 收率大小依次是：CMC-Na 法〉酸性丙酮法〉冰醋酸法。但纯度可以通过经过重 结晶提高，所以总的来说，那种方法所得氯化血红素收率越高，这种方法也就越 好，所以在三种方法种，CMC-Na 法制备氯化血红素