(介绍)调节性T细胞研究进展.docVIP

?提要：调节性T细胞是不同于Th1和Th2的具有调节功能的T细胞群体，因其具有免疫抑制作用，近来受到人们的广泛关注，本文综述调节性T细胞近来的研究进展。 关键词：调节性T细胞；细胞因子；免疫 ? 调节性T细胞是不同于Th1和Th2的具有调节功能的T细胞群体，具有免疫抑制功能，在多种免疫性疾病中起重要的调节作用，成为近年来免疫学领域研究的重要内容。 ? 1 调节性T细胞分类 ? 调节性T细胞（Tr）在体内外具有调节功能，根据其表面标记、产生的细胞因子和作用机制的不同，Tr可分为CD4+CD25+Tr细胞、Tr1和Th3等多种亚型。 1.1? CD4+CD25+Tr? 目前研究得较为清楚的亚型为CD4+CD25+Tr。研究表明，在正常人和小鼠的外周血及脾脏组织的CD4+T细胞中约有5%～10%的细胞持续表达CD25分子（IL-2受者α链），同时这一亚群是CD45RB分子低表达的。CD4+CD25+Tr具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特性。其免疫无能性表现在对高浓度IL-2的单独刺激，固相包被或可溶性抗CD3单抗，以及抗CD3单抗、抗CD28单抗的联合作用呈无应答状态，也不分泌IL-2。当经TCR介导信号刺激并有高浓度外源IL-2存在的情况下，CD4+CD25+Tr可活化并增殖，但其增殖程度较CD4+CD25-T细胞弱很多。 ? CD4+CD25+Tr的免疫抑制性表现在经TCR介导的信号刺激活化以后能够抑制CD4+和CD8+T细胞的活化和增殖。 ? 1.2 Tr1? Tr1是另一类亚型的CD4+Tr。在IL-10存在的情况下，可通过异源抗原活化的人类T细胞经克隆产生，IFN-α可增强IL-10诱导产生Tr1的能力。另外 ，抗原与CD2共刺激可通过IL-10非依赖途径诱导产生抗原特异性Tr，产生大量IL-10，并具有调节功能。最近Kemper等研究发现，在IL-2存在的情况下，人CD4+T细胞与CD3和补体调节剂CD46结合诱导生成Tr1特异性细胞因子表型的T细胞。这种细胞增殖能力强，并具有旁观者抑制效应和免疫记忆力。Tr1与 Th1 和Th2之间的区别于Tr1可产生高水平的IL-10，中等量的TGF-β、IFN-γ和IL-5，少量的IL-2，不产生IL-4。刺激TCR不能使Tr1有效增殖，有研究显示IL-15对于刺激Tr1在体外增殖至关重要。Tr1抑制免疫反应的主要机制依赖于产生具有免疫调节功能的细胞因子如IL-10和TGF-β。 ? 1.3? Th3?Th3型CD4+Tr是在研究口服耐受机制的过程中发现的，Th3主要分泌TGF-β，对Th1和Th2都具有抑制作用。Th3可从IL-4缺陷小鼠产生，显示Th3是与Th2不同的一种独特类型。TGF-β、IL-4、IL-10可促进TCR转基因小鼠Th前体分化为Th3。低剂量抗原口服诱导产生Th3，同时口服IL-4可促进Th3的产生。 ? 由于不成熟树突状细胞（DC）在体外诱导产生的CD4+Tr和体内诱导产生的CD8+Tr与Tr1具有相同的特性，即都产生高水平的IL-10，但不产生IL-4或IL-2。然而，与Trl比较，不成熟DC诱导产生的CD4+Tr在体外的抑制活性不依赖于IL-10。并且，由不成熟DC在体外诱导产生的CD4+Tr通过抗原非依赖机制直接抑制成熟Th1的增殖反应，该过程需要细胞与细胞之间的接触，并可被外源性的IL-2所抑制。因此，从功能上讲，这些Tr更类似于上述的CD4+CD25+Tr。 ? 目前还不清楚CD4+CD25+Tr与Trl之间的关系，有人认为它们可能是处于不同分化阶段的同一Tr亚型，CD4+CD25+Tr可能来源于胸腺部分分化的T细胞，并在外周遇到抗原时最终分化为产生IL-10和TGF-β的Trl。但较多倾向认为CD4+CD25+Tr与Tr1是两种不同的细胞亚型，有研究观察到小鼠CD4+CD25+Tr属于CD45RBlow群体，而Tr1在体外由CD45RA+初始细胞分化而来。 ? 2 调节性T细胞的分离、纯化及克隆扩增方法 ? 获得大量的调节性T细胞是对其进行研究的前提，正常情况下淋巴结、脾脏及外周血存在一定数量的CD4+CD25+Tr，可通过CD标记，免疫磁珠分选法获得大量CD4+CD25+Tr。Trl主要通过克隆扩增的方法获得，较为复杂。 ?2.1? CD4+CD25+Tr的分离、纯化? 制备单个细胞悬液，以T细胞纯化柱分离小鼠淋巴结或脾脏T淋巴细胞，以抗-CD8-FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阴性选择法剔除CD8+T细胞，再以抗-CD25-FITC抗体和抗FITC标记磁珠相结合的阳性选择法选出CD25+T淋巴细胞。也可采用CD4+T细胞亚型纯化柱分离得到CD4+T细胞，再结合抗-CD25-FITC抗体，以流式细胞仪分选出纯化的CD4+CD25+T