实验七 微生物细胞大小测定.docVIP

实验七 微生物细胞大小测定 实验目的 1．了解目镜测微和镜台测微的构造。 2．掌握用显微测微测量微生物细胞大小的方法啤酒酵母菌24h液体培养物光学显微镜、镜台测微、目测微、盖玻片、载玻片、香柏油、擦镜纸。在一定条件下，各种微生物细胞的大小，是微生物形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。微生物细胞很小，只能在显微镜下测量，一般采用显微测微来测量。显微测微有镜台测微和目测微两个部件。镜台测微是中央部分刻有精度等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格，每格长度10(m，用于校正目测微。目测微是一块可放在目镜内的圆形玻片，其中央一般有100等分的小格目测微可直接用于测量细胞的大小。目测微代表的长度目测微目测微1．放置目镜测微取出目镜，旋开目镜，将目测微放在目镜的隔板上（有刻度的一面向下），然后旋上目镜，最后将此目镜插入目镜镜筒内。 2．放置镜台测微 把镜台测微计放在显微镜载物台上（有刻度的一面向上）3．校正目测微 用低倍物镜观察，对准焦距，通过调焦能看清镜台测微计的刻度；移动镜台测微和转动目测微使两者刻度平行；转动推进器从而使某段起、止线完全重合，数出两条重合线之间的格数。4．计算目测微每格的相对长度 目测微每格的长度（(m）＝ （二）测定啤酒酵母细胞的大小 目测微取下镜台测微，将啤酒酵母制成水浸片放在显微镜载物台上，用高倍镜观察，调至物象清晰后，转动接目测微，测量酵母菌细胞的长度和宽度分别占有几个格数，再将测得的格数乘以接目测微每格的相对长度即可求出酵母菌细胞的大小。 要求在同一张片上测定10个酵母细胞并求出平均值，这样才能代表酵母细胞的平均大小。 最后取出目镜测微，将目测微和镜台测微分别用擦镜纸擦拭后放回干燥保存。目测微目测微测微目测微目测微目测微目测微 实验材料： 1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌等； 2、培养基：肉膏固体培养基、肉膏液体培养基、肉膏半固体培养基、肉膏固体斜面培养基； 3、其他：接种环、接种针、酒精灯等。 实验内容： 一、平板划线接种法（分离出纯种细菌，以利作纯培养）。 通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平板表面充分地分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。若需从平板上获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。 操作方法： 1、右手拿接种环，烧灼冷却后，取菌液一环。 2、左手抓握琼脂平板，在酒精灯火焰左前上方，使平板面向火焰，以免空中杂菌落入，右手将已沾菌的接种环在琼脂平板表面密集而不重叠的来回划线，面积约占整个平板的1/5-1/6，此为第一区。划线时接种环与琼脂呈30-40度角轻轻接触，利用腕力滑动，切忌划破琼脂。 3、接种环上多余的细菌可烧灼（每划完一个区域是否需要烧灼灭菌视标本中含菌量多少而定），待冷后，在划线末端重复2-3根线后，再划下一区域（约占1/4面积），此为第二区。 4、第二区划完后可不烧灼接种环，用同样方法划第三区，划满整个平皿。 5、划线完毕，将平板盖好皿盖并作好标记（在培养皿低部做标记），置37℃温箱孵育18-24h观察琼脂表面菌落分布情况，注意是否分离出单个菌落，并记录菌落特征（如大小、形状、透明度、色素等）。 菌落：单个细菌在固体培养基上生长繁殖形成肉眼可见的细菌集团。一个菌落由一个细菌生长而成的。细菌的菌落一般分为三种：光滑型菌落（S型菌落）、粗糙型菌落（R型菌落）和粘液型菌落（M菌落） 二、液体培养基接种法（可以观察细菌不同的生长性状、生化特性以供鉴别之用）。 1、右手握住接种环，灭菌冷却后取单个菌落。左手拇指、食指、中指托住液体培养基下端，右手小指和无名指（或手掌）拔取试管塞，将管口移至火焰上旋转烧灼。 2、将沾菌的接种环移入培养基管中，在液体偏少侧接近液面的管壁上轻轻研磨，沾取少许液体与之调和，使菌液混合于培养基中（图9）。 3、管口通过火焰，塞好试管塞，将接种环灭菌后放下，经37℃温箱孵育18-24h，取出观察生长情况。 （1）均匀混浊生长，大多数细菌（兼性厌氧菌）。 （2）菌膜形成，液体澄清或稍混（专性需氧菌），如：枯草杆菌。 （3）絮状沉淀物，沉淀物上的液体仍清澈（专性厌氧菌），如：链球菌。 三、半固体穿刺接种法（观察细菌动力，保存菌种）。 1、以无菌操作用接种针挑取单个菌落，立即垂直插入培养基中心至接近管底处循原路退回。 2、管口通过火焰，塞上棉塞，接种针灭菌后放下。试管置37℃温箱孵育18-24h，取出后对光观察穿刺线上细菌生长情况：细菌有无向周围扩散生长，穿刺线是否清晰等。 穿刺线模糊：有鞭毛的细菌可沿穿刺线生长，并向四周游动扩散，使培养基混浊，穿刺线模糊。 穿刺线清晰：无鞭毛的细菌只沿穿刺线生长，而线周围培养基仍透明澄清。 四、斜面培养基接种法（常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种）。 1、以无菌操作法用接种环挑取单个菌落，自斜面底