天然产物的提取分离.pptVIP

四、透析法 利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，大分子则不能通过半透膜的性质进行分离的方法。 如分离纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等大分子时，用此法可除无机盐、单、双糖等小分子杂质 。 透析膜的膜孔有大有小，视具体情况而选择，常用透析膜：动物性膜、火棉胶膜、硫酸纸膜、玻璃纸膜等。 五、结晶、重结晶和分步结晶 六、层析法 1、柱层析 2、薄层层析 3、纸层析 4、凝胶层析 （又称凝胶过滤、分子筛过滤、阻滞扩散层析、排阻层析等） 4、凝胶层析 （Gel Penetration Chromatography, GPC） ① 葡聚糖凝胶 交联葡聚糖是由一定平均分子量的葡聚糖和交联剂（一般为环氧氯丙烷）以醚桥的形式互相交联形成的三维空间网状结构高分子材料，是水不溶性的白色球状颗粒，酸性环境能水解，碱中稳定。 在样品通过一定孔径的凝胶固定相时，由于流经路径的不同，使不同相对分子量的组分得以分离的方法。 表面有孔隙，其大小决定于聚糖与交联剂的配比及反应条件。 商品型号即按凝胶的交联度大小分类，并以吸水量来表示，英文字母G代表葡聚糖凝胶，后面的数字表示每克凝胶吸水量，再乘以10的值，G-25的吸水量为每克2.5ml。 交联度大→网状结构越紧密→孔隙越小→吸水膨胀越少。 型号 吸水量 （ml/g） 床体积 （ml/g） 分离范围 最小溶胀时间 肽与蛋白质 多糖 室温 沸水 G-10 1.0 2~3 小于700 小于700 3 1 G-15 1.5 2.5~3.5 小于1500 小于1500 3 1 G-25 2.5 4~6 1000~5000 100~5000 6 2 G-50 5.0 9~11 1500~3万 500~1万 6 2 G-75 7.5 12~15 3000~7万 1000~5万 24 3 G-100 10 15~20 400015万 1000`10万 48 5 G-150 15 20~30 5000~40万 1000~15万 72 5 G-200 20 30~40 5000~80万 1000~20万 72 5 凝胶的型号与使用范围 ②层析原理 绝大部分在水溶液中进行，凝胶颗粒在适当溶剂中浸泡，待充分膨胀后装入层析柱，加样后用同一溶液洗脱。在洗脱过程中，较小的分子渗入凝胶，较大的分子随溶液流动，分子量小的物质（阻滞作用大）可通过凝胶网孔进入粒子内部，然后扩散出来，故流程长，移动速度慢，后流出色谱柱，分子量大的物质沉凝胶粒子间孔隙，随洗脱液移动，流程短，移动速度快，先流出色谱柱。 不同的化合物由于其大小差异，在流经GPC柱时，不同分子量的化合物流经体积不同（大分子不能或难以进入凝胶网格结构的内部，直接从凝胶颗粒之间穿过，保留时间短；而小分子恰恰相反，保留时间较长）而得以分离 。 常用术语 Vt—— 床体积，凝胶装柱以后，柱床所占的体积。 Vo——外水体积，柱床内存在于凝胶外面的水相体积。 Vi——内水体积，凝胶颗粒内部所含的水相体积。 Vg——凝胶本身体积。 相互关系：Vt= Vo+ Vi+ Vg Ve——洗脱体积，自样品加入时算起，至流出组分最大浓度出现时，所流出的体积 。 同一类型化合物，洗脱特征与组分分子量有关。 Ve=K1-K2logM 说明不同组分流经凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的，洗脱体积小，最先流出，当条件固定时，Ve重现性很好。 按此特性可测大分子物质的分子量。 用已知分子量的物质分别相继上柱（5mg），流出液按每管2~4ml收集，通过硫酸蒽酮显色，再经紫外检测，分别求得洗脱体积Ve。再用蓝色葡聚糖测出柱床的外水体积Vo，按Ve /Vo与分子量对数关系作图，得标准曲线，最后将待测物质分子量用少水溶解上柱，在同样条件下测定Ve，根据Ve/Vo，查标准曲线，测得物质分子量。 局限性： 1、要有标准样。 2、不同的待测物质要有不同的标准样。 操作技术： 溶胀：不同凝胶溶胀时间不一样，G-100室温下最小水化时间72h，除微颗粒。目的：充分吸水，各孔隙舒张，以利于物质分子通过。 装柱：柱内加少量洗脱液，排除底部气泡，然后将凝胶浆倒入，让其自然沉降，打开出口，柱床表面不再下沉即紧密。装好的柱应不含气泡，柱床表面平坦。 平衡：用3倍床体积洗脱液让柱平衡流动2-3天，至流速恒定