降纤酶药品标准.docVIP

国家药品监督管理局 国家药品标准 WS1-XG-031-2000 ___________________________________________________________________________________________ 降 纤 酶 Jiangxianme ??????????????????????????????? ? Defibrase????????????????????????????? ??????????? ?本品系长白山白眉蝮蛇[Agkistrodon halys (ussriensis Emelianor)]或尖吻蝮蛇[Agkistrodon acutus (Guenther)]蛇毒中提取的蛋白水解酶，每1mg蛋白含降纤酶效价不得少于1200单位。????????【性状】本品为白色非结晶状粉末，有引湿性。?????????本品易溶于水。???????? 【鉴别】(1)取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。取人-枸橼酸血浆[取枸橼酸钠38g，加水1000ml溶解，按枸橼酸钠溶液-人血(1:9)比例混合，3000转/min离心30分钟。取上清液分装成每支1ml，冷冻干燥，使用前加水1ml，摇匀，三小时内使用]0.3ml，加400IU/ml肝素钠溶液0.05ml，混匀，加入供试品溶液0.05ml，37℃保温，1分钟内，血浆应凝固，加入1％氯醋酸溶液1ml，振荡，凝块全部溶解，呈澄清透明溶液。(2)取上述供试品溶液0.2ml，加L-BAPA液[取盐酸苯酰-L-精氨酰-P-硝基苯胺(Benzoyl-L-Argi-nyl-P-Nitroaniline Hydrochloride)5mg，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.2)(取三羟基甲基氨基甲烷18.17g与氯化钠0.8g，加水800ml溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.2，加水至1000ml)5ml，溶解]0.2ml，置37℃保温30分钟，溶液呈黄色。?????????? (3)取本品适量，照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(附一)测定，其主成分分子量应为36000(±5000)。?????????【检查】纯度??(1)取本品适量(约相当于蛋白量10μg)，照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定(附一)，在分子量31000～41000以外不得出现其他电泳带。??????????(2)照高效液相色谱法测定(中国药典2000年版二部附录Ⅴ D)。??????????色谱条件与系统适用性试验??用凝胶色谱柱(如BiosepS2000 7.8mm×300mm，5μm)；以0.2mol/L磷酸钠缓冲液(pH6.8)(取磷酸氢二钠175.4g与磷酸二氢钠79.56g，溶解于900ml水中，调节pH值至6.8，加水至5000ml)为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。理论板数按降纤酶峰计算应不得低于3000。?????????测定法??取本品用流动相稀释成每1ml中含1mg的溶液作为供试品溶液，取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，供试品中主峰相对百分含量不得低于90.0％。?????????出血毒??取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含100单位的溶液作为供试品溶液。取体重18～22g的小白鼠5只，背部皮下注射供试品溶液0.2ml，注射后24小时处死动物，剥皮观察，小鼠背部注射部位不得有出血现象。神经毒??取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含75单位的溶液作为供试品溶液。取体重为300～500g的鸽3只，每1kg体重静脉注射供试品溶液0.5ml，观察24小时，动物不得出现抽搐、死亡，如3只鸽中有一只出现抽搐或死亡，应另取鸽5只复试，均不得出现死亡。___________________________________________________________________________________________ 国家药品监督管理局发布 国家药典委员会 审定 16-88?? 【效价测定】 酶活力??以每1mg蛋白含酶活力计。????????? 标准品溶液的制备??取降纤酶标准品，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.4)制成每1ml中含20、10、5、2.5单位的溶液。?????????? 供试品溶液的制备??取本品适量，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.4)(取三羟甲基氨基甲烷2.42g与氯化钠0.585g，加水适量使溶解，