编号：生物农药研究中心[2010-05-19], 共17页.docVIP

编号：生物农药研究中心[2010-05-19], 共页 承担单位：福建省农科院试验项目：试验人员：试验负责： 报告日期：200 计数月份：200 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计不足，实施错误 6%-10% 设计不全，实验无果 11%-15% 设计可以，实施不全 16%-20% 设计完整，分布实施 21%-25% 实验不全，记载无果 26%-30% 实验不足，记载不全 31%-35% 独立实验，记载不全 36%-40% 分布实验，记载完整 41%-45% 目的明确，实验完成 46%-50% 实验完整，记载清晰 51%-55% 实验系统，结果可信 56%-60% 实验创新，分析清晰 61%-65% 实验创新，结论清晰 66%-70% 实验完整，统计清晰 71%-75% 实验系统，数据可靠 76%-80% 报告完整，文章雏形 81%-85% 结构合理，分析有据 86%-90% 逻辑清晰，统计合理 91%-95% 图表完整，写作流畅 96%-100% 文献完整，发表水平 福建省农业科学院生物农药研究中心 电话: 0591 传真: 0591 试验目的 2．2.1 材料 2.1.1 堆肥样本 在堆肥试验的第2、4、8、16、32天，每堆堆肥分三层取样，然后拿回实验室过筛处理后，把每堆三层的样本混合均匀，然后分别分成三份:第1份用于理化性质的测定，约500g，室温保存；第2份用于土壤微生物群落结构分析，约20g，-70℃保存；第3份用于可培养微生物类群分析，约50g，放于4℃冰箱中报存，每份样本分成三个平行重复样品。 2.1.2 目标菌的分离保存 无致病力尖孢镰刀菌与淡紫拟青霉分离培养基-PDA培养基：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂18g；无致病力铜绿假单孢菌、凝结芽孢杆菌LPF-1菌株、短短芽孢杆菌JK-2-GFP菌株、蜡状芽孢杆菌ANTI-8098A菌株分离培养基-NA培养基：牛肉浸膏 3g, 蛋白胨5g，葡萄糖10g，琼脂18g，pH 7.0；无致病力青枯雷尔氏菌分离培养基-TTC培养基：葡萄糖5g,蛋白胨10g,水解酪蛋白1g,100ml培养基加入1.0%TTC溶液0.5ml.目标菌的保存-80℃超低温冰箱，冷冻管，甘油。 2.1.3 16srDNA分子鉴定 待测菌株：5545,5547,5557,5558,5560,5561,5563-5566,5569,5570,5575,5664-5666, 5672,5673, 5675, 6005,6008-6010,6013,6014. 去离子水，Buffer Taq Reaction 10×，dNTP MIx (dATP，dCTP，dGTP，dTTP each10 mM)，Taq酶 DNA Polymerase，琼脂糖。以上试剂是从上海生工购买的天为时代。试验方法 2.2.1 目标菌的分离方法 采用稀释涂布法从土壤中分离芽孢杆菌，实验方法操作参照参照钱存柔、黄仪秀编著的《微生物学实验教程》[67]。具体操作方法如下：称样称取10 g垫料至装有90 mL无菌水的三角瓶，振荡15 min， 使之充分溶解，即配成10-1浓度吸取1 mL原液至装有9 mL无菌水的试管，即配成10-2浓度，依次稀释成10-3、10-4、10-5、10-6涂布超净台上无菌操作，溶液在振荡器上振荡10-20 s，吸取100 μL相应标记浓度的平板上，溶液滴至平板中央，涂布棒涂匀。每个梯度重复3次培养将涂好的平板用倒置于30 ℃恒温箱中培养1-2 d；划线分离选取要纯化分离的芽孢杆菌菌株并编号，纯化后30 ℃培养箱中培养结果计算每克土样中芽孢杆菌的数量＝同一稀释度的3个平板上菌落平均数×稀释倍数/含菌样品克数。 2.2.2 16srDNA分子鉴定 菌液制备 挑取2环纯化的菌落于1.5ml离心管中，加入1μl1MNaOH和2.5μlSDS（2%），再加入16.5μl无菌水于95℃煮15min，然后加入180μl无菌水，于-20℃保存。 16srDNA的扩增引物 16srDNA基因序列扩增引物由上海生物工程有限公司合成，引物序列如下：正向引物：5’- AGT