论大熊猫基因资源库构建及粪便高质量DNA提取方法的建立.pdfVIP

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2017-08-27 发布于浙江
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论大熊猫基因资源库构建及粪便高质量DNA提取方法的建立.pdf

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Y929291 单位代码：研究生学号：大熊猫基因资源库构建及粪便高质量DNA提取方法的建立论文评阅人：答辩委员会答辩日期三雯墨态堡三月浙江大学博=卜论文摘要 1为载体， 1．本文以大熊猫的成纤维细胞和肝组织细胞为材料，以pBeloBACl 构建了大熊猫基因组的细菌人工染色体DNA文库。该文库包含了93700个克隆，分别保存于977块96孔细胞培养板中。经过对100个随机抽样的克隆分析表明，插入片段的平均大小为160kb，相当于大熊猫基因组的5 倍，即5个库容量。酶切10个克隆证明，经过100代繁殖后，其插入片段仍稳定不变。 Mini 2．采用RNeasy mechanismat5’endofRNA 盒纯化得到mRNA。利用SMART(switching 库中，肝脏文库含有约5．OX106个重组子，而脑组织文库含有约3．5×106个％以上。鉴定结果表明，大熊猫肝脏和脑组织eDNA文库质量良好，为进一步筛选和克隆大熊猫肝脏与脑组织特异性表达基因，提供了材料平台。 3．通过本研究，建立了从大熊猫粪便样品中提取高质量DNA的技术体系：(1) 干扰作用；(3)通过分级离心的方法富集大熊猫消化道上皮细胞。研究同时表明，使用该方法还能够从福尔马林固定的粪便中提取大片段的DNA。这一技术体系的建立，促进了大熊猫保护遗传学的研究，也为其它野生动物的保护遗传学研究提供了良好的技术借鉴。关键词：大熊猫，细菌人工染色体，基因组文库，eDNA文库，粪便DNA 瓣江大学博士论文 ConstructionofaGiant resourceandcreationofamethodof gene library DNAfromfeces highlyquility Abstract 1．GenomicistherecombinantDNAclones entire library containing random ofacertain is to essential fragments organism．It genome structureandfunction bacterialartificial research．Thereinto， isthemost used at widelyone due chromosome(BAC)library present toits transformation