兰花高频再生体系探究.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiA ．Sci．2009，37(19J：8854—8856 责任编辑 常俊香 责任校对 卢瑶 兰花高频再生体系探究 周丽 (黔西南民族师专化生系，贵州兴义56240o) 摘要 [目的]为兰花转基 因工程研究奠定基础。[方法]以大花蕙兰原球茎、小苗和春兰种子为材料，以MS为基本培养基，将原球茎切 成薄片slice、小苗叶片切成小段进行诱导培养，用舍有c ’基因的农杆菌对春兰幼小原球茎进行转化，检测G ，的瞬间表达。[结果] 薄层切片较薄时，褐化和死亡率较高，但从切 口处长出的原球茎多而圆；薄层切片较厚时，褐化和死亡率较低，但切口处无再生原球茎产 生；对切片进行7d的暗处理可提高薄层的再生率，黑暗中再生的白色原球茎见光培养2～3d后即可转绿，并很快分化出小芽；叶片原 球茎仅在叶片基部的居间分生组织处产生；小于1nun的类原球茎为最佳转化受体 ，G 的瞬间表达率可达60％。[结论]建立了兰花 高频再生体系。 关键词 兰花；原球茎；薄层培养 中图分类号 $682．31 文献标识码 A 文章编号 0517—66Il(2009)19—08854—03 ExplorationonlIiglIFrequencyRegenerationSystemof0rchid ZH0ULi (DepratmentofBiologyandChemistry，SouthwestGuizhouNormalColegeforNationalities，Xingyi，Guizhou562400) Abstract [Objective]，nleaimwastoprovidehtebasisf0rtIlestudyoftransgenicengineeringoforchid．[Method]Wihtprotoeorm，small seedingofhybridcymbidium andhteseedsofcymbidium astIIematerialsandMSasthebasicmedium．hteprotoeormwaschoppedintoslices andtheleavesofseedlingswerechoppedintosection，andthen血eywereculturedofrprotocomr induction．Theiuvenalprotocormofcymbidi． amwaS transfefredbyagrobacterium山atcontainGFPgene，andhteinstantexpressionofcFPwasdetemrined．IResult]Whentlleslices werethin．theirbrowningrateandmortalityratewerehigher．buttheprotocomr from incisionwasmoreandround．W}．Ien thesliceswere thick。theirbrown ingrateandmortalityrateWaS lower，buthterewerenoprotocorm generatedformhteincision．Darktreatmentonslicesofr 7dcouldimprovetIleirregenerationrate．andhtewhiteprotocorm generatedunderdarkconditioncouldbecomegreenafter2—3dofculture thsnnlisht．andhteycoulddifferentiatelittlebudquickly．Leafprotocomr onlygeneratedfrom intercalarymeristem atthebaes of1eaf．The protocomr -likebodieswhichdjametersmallerthan1inlnwerehtebesttransfomr ationreceptors．inwhichtlleinstantexpressionofGFPcould reach6o％．IConclusionIThestudyestablishedhtehighrfequencyregenerationsystemoforchid． Keywords Orchid：Protocomr ：Thincelllayerculture 兰花通常指兰科观花植物，深受人们的喜爱 J。多年