4-3 中药制剂分析其他定量方法.ppt

可见－紫外分光光度法 大纲要求 熟悉单波长光度法的一般要求及测定方法 了解等吸收点法的基本原理及测定方法 可见-紫外分光光度法 通过测定被测物质在可见－紫外光范围内特定波长或一定波长范围内的吸光强度或发光强度，对该物质进行定量分析的方法 可见-紫外分光光度法 要求被测成分或其显色产物对可见－紫外光具有选择性吸收 类型：单波长光谱法和多波长光谱法（计算分光光度法） 可见-紫外分光光度法 要求： 选择被测成分的ymax为测定波长，而共存组分在此波长处基本无吸收，并控制供试液的吸收度读数在0.3-0.7之间 方法： 1.吸收系数法 2.对照品比较法 3.标准曲线法 可见-紫外分光光度法 1.吸收系数法：测定供试品溶液在规定波长处的吸收度，根据被测成分的吸收系数计算其含量 A=E·C·L 可见－紫外分光光度法 2.对照品比较法 在同样条件下，配制对照品溶液和供试品溶液，在规定波长处测定两者的吸收度，计算含量 分析步骤 ① 选择双波长（λ1、λ2） ② 绘制标准曲线 △Ａ对浓度Ｃ作图（回归） 样品测定 λ1、λ2，分别测定Ａ1及Ａ2 △Ａ 应用条件： 吸收曲线有峰和谷 图1－4可用双波长消除杂质干扰，直接测定 但图5－10，无杂质的等吸收点 能否采用等吸收双波长法？ 能否采用双波长法？ 应用 大类成分的测定：总黄酮、总生物碱、总蒽醌，多糖 薄层扫描法 Thin layer chromatogram scanning TLCS TLC大纲要求 了解薄层扫描法的基本原理 了解薄层扫描法的定量分析方法 薄层扫描法 样品经薄层色谱分离后，用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据进行含量测定。 TLCS基本原理 薄层吸收扫描法 适用：在可见光、紫外区有吸收，及通过衍生、显色等处理而具有上述性质的成分。 光源：钨灯（370-700nm)、氘灯(200-370nm) 定量分析的依据：Kubelka-Munk曲线。由于薄层板存在明显的散射现象，在测定时，需要根据板的散射参数SX（Scattering Parameter）），将Kubelka-Munk曲线校正为直线。 TLCS基本原理 薄层吸收扫描法 SX的影响因素：薄层板厚度、散射系数。 Merck硅胶板SX=3;氧化铝板SX=7 青岛海洋化工厂硅胶板SX＝3 类型：透射法、反射法、投射－反射法 薄层扫描原理 （一）Kubelka-Munk理论原理 Kubelka-Munk理论原理 理想的空白薄层板(简称空白板)：单位薄层厚度的吸光系数K=0。 一般空白板：K≠0 Kubelka-Munk 曲线校直 薄层色谱斑点的吸光度与其浓度间呈非线性关系，该曲线是薄层扫描法进行定量分析的理论依据 曲线处理采用两类方法： 曲线校直法――CS系列仪器 计算机回归法(线性及非线性回归)――CAMAG仪器采用 TLCS基本原理 薄层荧光扫描法 适用：本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的成分测定 光源：汞灯或氙灯（200-700nm) 定量依据：当点样量很小时，斑点中组分的浓度与其荧光强度成线性关系 类型：产生荧光的成分：荧光扫描法；有紫外吸收而不能产生荧光的成分：荧光淬灭法 薄层扫描法试验选择 薄层扫描法试验选择 薄层扫描法试验选择 1.样品溶剂： 应将样品溶于易挥发的有机溶剂中，如CHCI3、CH3OH、C2H5OH；尽量不用水，以免降低吸附剂的活性 2.上样工具：定量毛细管、微量进样器等 3.位置： 4.样斑大小： 薄层扫描法试验选择 点好样品的薄层板浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密闭 上行展开： 一般薄层板：8-15cm 高效薄层板：5-8cm TLC定量分析方法学考察 TLC定量分析方法 外标法（最常用） 内标法 影响薄层扫描定量的因素 1、吸附剂的性能及薄层质量： （１）吸附剂颗粒大小、孔径、分布均匀度，均能影响分离和检出限度。 （２）薄层厚薄均匀，则Ｒf值重现性好 影响薄层扫描定量的因素 ２、点样：是薄层定量误差的主要来源 点样必须准确 （１）原点直径以１～３mm为宜； （２）点样量应适当： 斑点拖尾 过多“超载” 重叠 峰形不对称 （３）“随行标准”：标准品与样品应交叉点于同一块板展开，可降低色谱误差 影响薄层扫描定量的因素 ３、展开条件：溶剂应纯度好 展开前应先饱和 温度恒定