甘露消毒丹对温病湿热证大鼠TLR4 mRNA、NF-κB p65表达影响.pdfVIP

维普资讯 广州中医药大学学报 2007年 11月第 24卷第6期 478 JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicjne Novemb。er200…7：Vo1． N‘ 文章编号：1007—3213(2007)06—0478—05 甘露消毒丹对温病湿热证大鼠TLR4mRNA、NF—s：Bp65表达的影响 程方平 ， 周 洁 ， 陈 娟 ， 刘松林 ， 梅 国强 (1．湖北中医学院温病教研室，武汉430061；2．华中科技大学同济医学院，武汉430030) 摘要：【目的】观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠细胞 内毒素Toll样受体4(TLR4)mRNA及核因子．KB (NF．KB)p65表 达变化的影响，探讨清热化湿方的治疗机制。 【方法】将Wistar大鼠随机分为正常组、湿热模型组 (高脂+高温高湿+大 肠杆菌)、清热化湿组；采用逆转录一聚合酶链反应技术 (RTPCR)检测肝组织巨噬细胞TLR4mRNA．免疫组化技术检测 肝组织巨噬细胞NF—KBp65表达。 【结果】模型组在感染6、12、24h不同时相点TLR4mRNA、NF—KBp65表达逐渐增强， 且不同时相点之间比较均有显著性差异 (P0．05或P0．01)，说明随着病程的发展，湿热模型TLR4mRNA、NF．KBp65 表达逐渐增强。治疗组6、l2、24h不同时相点的TLR4mRNA表达逐渐减弱，12、24h时相点治疗组与模型组比较，TLR4 mRNA表达显著性减弱 (P0．05或P0．01)，但与正常组比较仍有显著性差异 (P0．01)，说明TLR4mRNA遏制衰减 是一个缓慢的过程。而治疗组NF—KBp65激活6、12、24h各时相点间比较均无显著性差异，与正常组 比较亦无显著性差 异，但与同时点模型组比较均有显著性差异 (P0．05或P0．01)。【结论】甘露消毒丹对温病湿热证大鼠肝巨噬细胞 TLR4mRNA及 NF—KBp65表达具有较好的干预调控作用，能中止炎症介质的转录，限制急性炎症反应。 关键词：甘露清毒丹／药理学； 湿热 中药疗法； 基 因表达调控； 疾病模型，动物； 大鼠 中图分类号：R285、5 文献标识码 ：A 温病湿热证是由湿热病邪引起的急性外感热 甘露消毒丹加郁金、姜黄组成 (滑石 30g，茵陈 病。其病因与发病正如薛生白所言： “太阴内伤， 20g，黄芩20g，石菖蒲 12g，川木通 10g，川贝 湿饮停聚，客邪再至，内外相引，故病湿热，”强 10g，藿香 10g，射干 10g，连翘 10g，薄荷 10g， 调 “内外合邪”、 “同类相召”是发病之关键。其 白豆蔻 10g，郁金 15g，姜黄 10g)，以上药物均 病机具有起病较缓，病势缠绵，病程较长的特点。 由湖北中医学院附属门诊部中药房提供，常规煎煮 王孟英 日：“此 (甘露消毒丹)治湿温时疫之主方 浓度为2kg／L药液，分装、灭菌，4℃冰箱保存； 也。……尚在气分，悉 以此丹治之立效。”如何认 高脂饲料 由武汉亚法生物技术有限公司提供，配方 识和阐述此病机 ，目前文献鲜有报道 。本实验拟观 为普通饲料 +25g／kg胆 固醇 +2 kg胆酸钠 +8O 察甘露消毒丹对湿热证模型大鼠细胞内毒素Toll样 蛋黄粉 +100 kg猪脂；Trizol试剂 (美 国 受体4 (Toll—likereceptor4，TLR4)mRNA及核因 Invitrogen公司)；逆转录酶、DNAMarker(美 国 子．KB (nut]earfactor．kappaB，NF·KB)p65表达 Promoga公司)；TaqDNA聚合酶、脱氧核苷酸三 变化的干预，旨在从细胞分子、生物学层次上探讨 磷酸 (dNTP) (美国MBI公司)；兔抗 鼠多克隆 湿热致病机制，现将结果报道如下。 NF．KB抗体 (美国Chemicoa公司)；聚合酶链反应