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核准日期：XXXX年X月X日 促卵泡激素定量试剂盒（磁分离酶联免疫法）说 明 书 【品名】促卵泡激素定量试剂盒（磁分离酶联免疫法） 【用途】 本品是为定量测定人血清或血浆内人促卵泡激素（FSH）的。 本方法适用样品浓度为0—150mIU/ml，不必稀释。标准品采用人FSH国际标准品(2nd IRP 78/549)，及中国国家标准品（533-9604）定值。 【概述和说明】 促卵泡激素是由垂体分泌的一种糖蛋白激素，分子量约为30,000道尔顿，由两个非共价键结合的α与β亚单位组成(1)。α链含有89个氨基酸，其结构与人LH和TSH的α亚单位相似，与hCG的α亚单位不同，后者多了三个残基(2,3)。β亚单位赋予了整个分子的免疫学特异性，而两个亚基结合方有生物活性(4)。 FSH的主要功能是促进卵巢内卵泡发育和促进睾丸内精子生成。它由垂体前叶嗜碱细胞分泌，并受到下丘脑产生的促性腺激素释放激素(LH-RH或 Gn-RH)的调控(5,6)。 FSH 的分泌还受到性腺类固醇激素施加在垂体和下丘脑上的负反馈调节(7,8)。研究表明：垂体分泌FSH分为两个相，即基础分泌相及脉冲分泌相(9,10)。但其浓度变化不如LH的浓度变化明显。 妇女在月经周期期间，血液内FSH的水平随着雌二醇和孕酮水平的变化而变化，即排卵前期能观察到LH与FSH的明显升高(11)；排卵后卵泡破裂，发育后的黄体分泌雌二醇和孕酮，它们反馈调节FSH的循环水平(4,12)。 绝经后，卵巢功能减退，雌二醇分泌减少，由于解除了施加在下丘脑上的负反馈，血循环中的FSH浓度显著升高(13)。 在成年男性体内，FSH、LH和睾酮一起促进并维持睾丸内精子的形成。男性不育有可能是由于原发性睾丸衰退引起的性腺机能减退(14)。在这些病变中，由于缺乏睾酮的负反馈作用而引起FSH水平的升高(15)。先天性曲细精管发育不良（Klinefelter’s综合征）患者的FSH水平也升高。50岁以上的男性，FSH的平均水平随着精子生成功能的逐渐衰退而升高(16)。 FSH水平低，可能表示下丘脑--垂体轴机能异常。垂体机能减退可能引起继发性性腺减退，也是不孕不育的原因之一。服用LH—RH后，测定血清FSH可用于评价垂体功能，以及对下丘脑、垂体疾病的鉴别诊断（如伴有偏低或正常FSH浓度的闭经或性腺机能减退）。 【原理】 本方法是酶联免疫分析系统与磁性微粒分离技术相结合的一种测定法，并使用了两种高亲合力的单克隆抗体。 标本，标准品和质控品(A)在试管内与二种抗FSH单克隆抗体的混合物起作用。酶联单克隆抗体很快从FSH分子的一侧与FSH结合，另一种荧光素标抗体从另一侧与FSH结合，形成“三明治”结构(B)。37℃水浴孵育15分钟后加入过量与磁性微粒结合的抗荧光素标抗体。它快速并特异性地与FSH单克隆抗体结合成复合体(C)。在磁场中沉淀，不需离心(D)。 倒去上清液，清洗沉淀的复合物后，加入基质孵育(E)。 37℃孵育15分钟后加入终止液，终止酶/基质反应(F)。然后用光度计测量生成物的颜色强度。 酶反应形成的颜色强度，在测定工作范围内与患者标本中FSH的浓度成正比。这样，患者标本、质控品中的FSH浓度，可用内插法，直接从标准曲线求得。 【试剂】 本试剂盒提供了200管份测试所需试剂。收到试剂盒后，2~8℃贮存至标签所示失效期。 1. 试剂组成 ⑴FSH 抗试剂 1瓶 内容物为含羊、牛血清蛋白的Tris缓冲液配制的荧光素标和碱性磷酸酶标抗FSH单克隆抗体（含0.2%w/v的NaN3）。20ml。 ⑵FSH 标准品 6瓶 分别为含0、1、3、10、50和150mIU/ml FSH(2nd IRP 78/549)的牛血清溶液（含0.2%w/v的NaN3）。每瓶1ml。 ⑶ 磁分离试剂 1瓶 内容物包括共价包被着羊抗荧光素抗体的磁性微粒0.6%w/v、含牛血清蛋白的Tris缓冲液和0.2%w/v的NaN3。10ml。 ⑷ 清洗浓缩液 1瓶 含有表面活性剂、防腐剂的Tris缓冲液。14.3ml。 ⑸ 基质 2瓶 含有单磷酸酚酞(PMP)、辅酶的缓冲液。每瓶15ml。 ⑹ 终止液 1瓶 含有氢氧化钠和螯合物的缓冲液，PH10，100ml。注意：有腐蚀性(见【注意事项】)。 ⑺通用质控品 1瓶 冻干人血清，复溶后为1ml。 2. 试剂的准备和贮存 ⑴ FSH 抗试剂 直接使用，2~8℃贮存至失效期，避免阳光直射。 ⑵ FSH 标准品 直接使用，2~8℃贮存至失效期。 ⑶ 磁分离试剂 直接使用。用前轻轻、彻底混匀，确保磁性微粒悬浮均匀。不能使用磁力搅拌器搅拌。2~8℃贮存至失效期。不能冻存。 ⑷ 清洗浓缩液 加纯化水至150ml，混匀。稀释后2~