产纤维素酶低温菌株的分离鉴定.pdfVIP

　山东 农 业科 学　２０１４，４６（３）：５４ ～５７ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 产纤维素酶低温菌株的分离鉴定 刘晓辉，高晓梅，桓明辉，邓春海，李　杨，熬　静，郭玲玲 （辽宁省微生物科学研究院，辽宁 朝阳　１２２０００） 　　摘　要：为促进秸秆还田，加快秸秆在北方设施土壤中的降解速度，以腐烂秸秆为待筛菌株原料，以玉米 秸秆粉为培养基，在１５℃低温条件下，采用刚果红平板法进行初筛，得到１６ 株菌株，对 １６ 株菌株进行酶活测 定复筛，其中Ｌ－１３酶活最高，达１ ６７９．６１ Ｕ／ｍｌ。对Ｌ－１３菌株的菌体形态、菌落特征进行观察，并进行了一 系列生理生化试验和１６Ｓ ｒＤＮＡ 序列分析，初步鉴定 Ｌ －１３ 为枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。此菌可以在 １５℃下快速生长繁殖并高产纤维素酶，低温条件下能快速降解秸秆。 关键词：玉米秸秆；低温；纤维素酶 中图分类号：Ｑ９３ －３３１　　文献标识号：Ａ　　文章编号：１００１－４９４２（２０１４）０３－００５４－０４ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆＬｏｗ－Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ Ｓｔｒａｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ Ｌｉｕ Ｘｉａｏｈｕｉ，Ｇａｏ Ｘｉａｏｍｅｉ，Ｈｕａｎ Ｍｉｎｇｈｕｉ，Ｄｅｎｇ Ｃｈｕｎｈａｉ，Ｌｉ Ｙａｎｇ，Ａｏ Ｊｉｎｇ，Ｇｕｏ Ｌｉｎｇｌｉｎｇ （ＬｉａｏｎｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｏｙａｎｇ １２２０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏｐｒｏｍｏｔｅ ｓｔｒａｗｒｅｔｕｒｎｉｎｇａｎｄ ｓｐｅｅｄｕｐ ｉｔｓｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｉｎｔｈｅ Ｎｏｒｔｈ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｓｏｉｌ， ｕｓｉｎｇ ｒｏｔｔｅｎ ｓｔｒａｗ ａｓｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｓａｎｄ ｃｏｒｎ ｓｔｒａｗｐｏｗｄｅｒａｓｍｅｄｉｕｍ，１６ ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄｗｉｔｈ Ｃｏｎｇｏ Ｒｅｄ ｐｌａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｔ １５℃．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ１６ ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｌ－１３ ｈａｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ１ ６７９．６１ Ｕ／ｍｌ．Ｔｈｅ ｍｙｃｅｌｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｃｏｌｏｎｙｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＬ－１３ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ，ａｎｄａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ ａｎｄ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅ Ｌ －１３ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ．Ｏｗｉｎｇ ｔｏ ｇｒｏｗｉｎｇ ｆａｓｔｌｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｙｉｅｌｄｉｎｇ ｏｆｃｅｌｌｕｌａｓｅ ａｔ １５℃，ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｄｅｇｒａｄｅ ｔｈｅ ｓｔｒａｗ ｕｎｄｅｒ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｒａｐｉｄｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ　Ｃｏｒｎ ｓｔｒａｗ；Ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ；Ｃｅｌｌｕｌａｓｅ 　　 我国的玉米秸秆资源分布较广，是一种易得 １　材料与方法 的可再生生物资源。目前秸秆的主要用途是秸秆 还田和制备粗饲料，但用量总和不足秸秆总量的 １．１　材料与试剂 ４０％，其余则被焚烧掉，造成了极大的资源浪费和 １．１．１　材料　玉米秸秆，采自朝阳市郊区，粉碎 环境污染。为了进一步提高秸秆的利用率，加快 后用于腐熟菌的筛选。 秸秆的降解速度，尤其是低温条件下的降解效率， １．１．２　试剂　０．０５ ｍｏｌ／Ｌ醋酸－醋酸钠缓冲液； 以满足北方冬季设施秸秆还田的需要，本试验在 ３，５ －二硝基水杨酸显色液（ＤＮＳ）；０．５％羧甲基 低温（