CTAB选择性沉淀和纯化质粒DNA工艺的建立.pdfVIP

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2017-08-31 发布于重庆
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CTAB选择性沉淀和纯化质粒DNA工艺的建立.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, December 25; 24(12): 2117-2121 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 技术与方法 CTAB 选择性沉淀和纯化质粒DNA 工艺的建立 1 1 1 1 1 2 张泉 , 于可响 , 袁维峰 , 薛方明 , 孙怀昌 , 朱鸿飞 1 扬州大学兽医学院, 扬州 225009 2 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100081 摘要: 通过直接在大肠杆菌碱裂解上清中加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB), 优化CTAB 与质粒DNA 量的比例、质粒DNA 选择性释放溶液的选择和TritonX-114 的使用, 建立了简单、易行的大规模质粒DNA 纯化工艺。纯化质粒DNA 的质量检测结果显示, CTAB 纯化的质粒 DNA 无菌体 RNA 污染, 菌体基因组 DNA 、内毒素和蛋白含量分别小于 100 ng/mg、50 EU/mg 和 10 μg/mg 质粒DNA, OD260/ OD280 比值介于1.75~1.85 之间, 超螺旋质粒DNA 的比例大于80%, 该工艺纯化的质粒DNA 能达到或接近FDA 规定的人用质粒DNA 的各项指标, 整个过程不使用动物源性酶和苯酚、氯仿、无水乙醇等有毒或易燃、易爆试剂, 成本低廉, 工艺环保。关键词: 十六烷基三甲基溴化铵, 质粒 DNA, 纯化, 质量检测 Purification of Large-scale Plasmid DNAs by Selective Precipitation with Cetyltrimethylammonium Bromide 1 1 1 1 1 2 Quan Zhang , Kexiang Yu , Weifeng Yuan , Fangming Xue , Huaichang Sun , and Hongfei Zhu 1 College of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China 2 Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China Abstract: Following Escherichia coli lysis with alkali, cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) was directly titrated into the s