动物细胞培养和核移植技术上课.pptVIP

3、动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶作用的对象有何不同？ 4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 动物细胞培养要经过脱分化吗？为什么？ 1.体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 2.2 动物细胞工程 单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础。 为什么要进行动物细胞培养? 1.动物细胞培养 动物细胞培养原理： 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1.1概念 细胞增殖（有丝分裂） 如何进行动物细胞培养？ 注意关键词: 细胞贴壁 、接触抑制 原代培养、 传代培养 细胞株、 细胞系 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎组织 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 （原代细胞） 胰蛋白酶处理 分化程度低，繁殖能力强，更容易培养。 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 分散后能与培养液充分接触，更易进行物质交换 原代培养：动物组织消化后的初次培养。 传代培养：原代培养过程中，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶培养，让细胞继续增殖。 原代培养特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。（10~50代细胞） 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。（50代后细胞） 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 1、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 思考题 2、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，获得细胞或细胞产物，不能发育成新的动物个体 第一次是将组织分散成单个细胞，第二次是将贴满瓶壁的细胞分散成单个细胞，便于分装后继续培养。 会，胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题： 讨论 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境 无菌、无毒的环境。 动物细胞培养的条件 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。） 3、温度和PH 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等物质，而且还含有多种未知的促生长因子，能促进细胞的生长、增殖和贴附 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 培养结果 获得细胞 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 1、大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 2、培养作为基因工程中的受体细胞 3、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4、为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 应用： 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞 2、动物细胞工程技术的基础是 　 A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　 C.