球囊损伤AS兔主动脉NF-κB及其mRNA表达及冠心通络方干预作用的研究.pdfVIP

世界中医药学会联合会心血管病专业委员会第五届国际学术大会论文汇编 基础研究 球囊损伤AS兔主动脉NF—KB及其mRNA表达及 冠心通络方干预作用的研究 ‘张炜宁 1唐新征 1林华 1吴学敏 2刘慧萍 (1广东省深圳市福田区中医院，2湖南中医药大学) 【摘要】目的观察球囊损伤后As兔主动脉NF．KB及其mRNA表达变化及冠心通络方对其表达水 平的干预作用。方法60只新西兰雄性大白兔随机分成治疗组、对照组、假手术组，正常饮食雄性大白 兔15只为阴性对照组。除阴性对照组外所有动物高脂饲料喂养4个月。4个月后冠心通络方组、模型组 均采用球囊拉伤，假手术组仅予静脉切开但不行球囊拉伤术。冠心通络方组在高脂饮食喂养同时给予冠 心通络方喂食，模型组及假手术组予高脂饮食。冠心通络方组行球囊损伤术后继续给药3天。给药完毕 后处死动物，取胸主动脉组织固定后以备实验，采用免疫组织化学法、Western B Blotting检测NF-x 表达，采用RT-PCR法检测NF-KB 上增性表达，与模型组比较差异有显著性意义(PO．01)。冠心通络方能明显降低其表达水平。结论冠 心通络方减轻血管内膜增生、防止血管再狭窄的内在机制可能在于：抑制NF-KB活性，进而抑制血管 平滑肌细胞增殖、血管内膜增生。 【关键词】冠心通络方冠心病动脉粥样硬化实验研究、经皮冠状动脉成形术核因子．KB 冠心病是临床常见、多发病，近年流行病学调查发现我国此病发病率呈上升趋势，不同地区报道冠 心病死亡率已达37．4—62．0／10万，已成为多数地区住院的首位心脏病种。因此，有关运用中医药防治 RS)是始终困扰相关学者的主要问题，RS的防治是目前国内外学者关注的热点。． 冠心通络方(原名冠心通络胶囊)是我们长期运用于临床，能有效治疗冠心病心绞痛的中药复方制 剂，前期研究【lJ已证实其临床疗效，并揭示部分作用机制。近期研究12l表明其能显著抑制血管内膜增生， 有效地防治球囊损伤后再狭窄。本文研究观察球囊损伤AS兔主动脉NF．KB及其mRNA表达变化及冠 心通络方的干预作用，以期从炎症增殖角度探讨其抑制RS的内在机制。现报告如下。 l材料与方法 1．1实验材料 医药研究院实验动物中心提供。随机分成治疗组(对照组+冠心通络方治疗)、对照组(球囊损伤州b组)、 假手术组，另设正常饮食雄性大白兔15只为阴性对照组。(2)实验药物：冠心通络方(黄芪309、生地 蛭lg、甘草log)，由湖南中医药研究院制剂室生产，试验药物均在实验前以蒸馏水配制成溶液，按体 表面积换算灌胃给药。(3)实验试剂与仪器：免疫组织化学试剂：增殖性核抗原(PCNA)，sP试剂盒；、 NF．K Np_40、二巯基乙醇、丽春红染料、丙烯酰胺(Acr)、亚甲基亚叉双丙烯酰胺(Bis)、NF．KB鼠抗人多 ．95． 基础研究 世界中医药学会联合会心血管病专业委员会第五届国际学术大会论文汇编 逆转录酶、DNase DNA聚合酶、RNA酶抑制剂；NF-gB及内参B-action随机引物由上海生工 I、Tap 生物工程公司合成，引物序列如下：NF-r,B 3’，下 游5’CTCTTrGATGTCACGCACGATrTC3’。其他试剂：胆固醇粉、二甲苯、乙醇、30％过氧化氢、 中性树胶、苏木素等由湖南中医学院病理教研室提供，猪油自制。电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械 尔滨市东联电子技术开发公司)光学显微镜(Olympus公司)等。 1．2实验方法(1)造模：除阴性对照组外所有动物高脂饲料喂养4个月(高脂饮食为除基础饲料喂 养外，每天加胆固醇lg，猪油109)。4个月后治疗组、对照组均采用球囊拉伤，假手术组仅予静脉切开 但不行球囊拉伤术。手术方法：经耳缘静脉2％戊巴比妥钠(2ml／gg)麻醉，常规消毒，经右股