番茄植株中的青枯病病原菌的分离鉴定及其雷尔氏菌的分布特点.docVIP

番茄青枯病病原菌的分离鉴定及其分布特点 周游1,2，2，刘波2(，朱育菁2，车建美2，张文州1,2 （1.福大学学院，福建 福州 350008；2.福建省农业科学院农业生物资源研究所，福建 福州 350003） 摘 要：调查了福建省福鼎市番茄青枯病的发生番茄上的菌株鉴定和分子鉴定相结合的方法从番茄的青枯病植株共分离到36种形态上类似青枯雷尔氏菌的菌株，一共筛选到27株青枯雷尔氏菌，并且包含4株弱。总体来看，在植株的不同发病的时期，植株体内的青枯雷尔氏菌的分布也是不同的，健康植株在茎上部分离到青枯菌，发病的植株，在其根部和茎基部分离到。发病的植株，分布在茎基部和茎上部发病的植株，只在茎上部分离到菌。总体分析：在植株发病的不同时期，植株体内的不同部位的菌含量也是不同的，它们之间也是存在差异的。关键词：番茄青枯病；；分布特点 Identification and Distribution Analysis of Bacterial Wilt Pathogens from Tomato Zhou You1,2, Zheng Xuefang2, Liu Bo2*, Zhu Yujing2, Che Jianmei2, Zhang Wenzhou1,2 （College Of Life Science Fujian normal university, Fuzhou 350108, China; 2Biotechnology Institution, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003）Abstract: Key words: tomato bacterial wilt, pathogen identification, distribution （前言请从研究目的意义、前人研究进展、本研究切入点、拟解决关键问题几个方面着手写） 由 Ralstonia solanacearum 引起的植物细菌性青枯病是一类世界范围的毁灭性土传病害，在热带和亚热带地区发生普遍，为害严重[1]。青枯菌寄主范围广泛，可侵染54个科的450余种植物[2]。该病除危害番茄外，还危害茄子、辣椒、花生、生姜等作物[3]。 番茄感染青枯病后，一般成株期发病，先是顶叶萎蔫下垂，然后下部叶片凋萎，最后中部叶片凋萎，也有一侧叶片先萎蔫或全株叶片同时萎蔫[4]。给农业生产造成极大的经济损失[5]。植株死亡后叶片仍保持青绿色[6]。本研究旨在通过采样、病原菌分离鉴定及致病性检测，旨在了解青枯病菌在植株不同发病时期的分布情况，为病害的防治提供依据。 目前对植物青枯病的防治尚未有理想的药剂，抗病品种的应用也受到地区间的限制以及品种抗性丧失等问题的困扰[7,8]，使得该病害的防治一直是一大难题。对植物青枯病进行生物防治是比较理想的方法，青枯病生物防治十余年来受到国内外研究者广泛关注[9]。 我们利用青枯雷尔氏菌的无致病力菌株处理植株，经过侵入、定殖，在植株体内形成营养竞争，构建植株体内微生态平衡，从而阻碍病原菌的侵入、抑制病害发生。[10-12]。 1. 材料与方法 1.1 番茄调查2011年12月，调查福建省福鼎市的番茄病发生情况与症状，并采集病株进行病原菌的分离鉴定。在福鼎市采集大棚成株期的发病级别0级、1级、2级和3级植株发病率及病情指数调查参照方中达《植病研究方法》的相关内容[13]。番茄青枯病按发病严重程度分为5级，O级为叶片无症状；1级为植株1/4以下的叶片表现萎蔫症状：2级为植株1/4-1/2叶片表现萎蔫症状：3级为植株1/2以上叶片表现萎蔫症状：4级为全株萎蔫死亡。 1.2 番茄青枯病病原菌的分离培养（分离方法简化，请参考相关文献） 植株预处理：植株先用清水清洗，用报纸将植株水分吸干。 称样及样品处理：称取根、茎基部、茎中部、茎顶部、叶各1 g，先用75℅酒精消毒30s再用10℅的NCLO消毒5min，然后用无菌水清洗3遍，再用灭菌滤纸将样品吸干，放至装有10 mL无菌水的研钵，充分研磨，即配成10-1浓度； 稀释样品原液：吸取1 mL原液至装有9 mL无菌水的试管，即配成10-2浓度，依次稀释配置成10-3。 平板涂布：超净台上无菌操作，溶液在振荡器上振荡10-20 s，吸取200 μL至相应标记浓度的平板上，溶液滴至平板中央，用涂布棒涂匀。涂好的平板正放静置一会，使溶液渗透进平板中。每个梯度重复3次； 培养:：将涂好的平板用袋子装好倒置于30℃恒温箱中培养60h； 划线分离纯化：观察分离培养的菌落，将要纯化的菌落标上标记，无菌操作用接种环直接取平板上要分离纯化的菌落至相应标记的平板上，划线完后放在30℃温箱中培养.； 发病植株周围土壤的分离，取10g土放在90m的水中，用无菌水依次稀释到10