共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性分析.pdfVIP

第32 卷 第3 期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol. 32 ，No.3 2010 年 3 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Mar. 2010 共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5 基因和 猪瘟病毒E2 基因的重组腺病毒的构建 及其在小鼠模型上的免疫原性分析 1 1 1 1，2 1 1* 李宏宇 ，孙 元 ，常天明 ，贺 番 ，黄俊华 ，仇华吉 (1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001； 2. 内蒙古农业大学动物科学与医学学院，内蒙古呼和浩特 010018) 摘 要：本研究旨在以复制缺陷型人 5 型腺病毒为载体，构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)变异株GP5 蛋白和猪瘟病毒(CSFV) E2 蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR 将GP5 和E2 基因通 过口蹄疫病毒(FMDV) 2A 序列连接，形成一个完整的ORF ，并将其克隆到腺病毒穿梭载体中，通过细菌内同源 重组构建共表达PRRSV GP5 蛋白和CSFV E2 蛋白的重组腺病毒(rAdV-GP52AE2) 。间接免疫荧光试验和western blot 检测证实2 个外源基因均获得表达。在小鼠上进行的免疫效力评价结果显示，rAdV-GP52AE2 免疫组针对 CSFV 的中和抗体滴度可达1∶ 128，针对PRRSV 的中和抗体滴度为1∶ 16；在淋巴细胞增殖试验中，免疫组与阴性 对照组在增殖指数上有显著差异，表明该重组腺病毒可以同时诱导抗PRRSV 和CSFV 的特异性体液免疫和细胞 免疫。这些结果显示，利用具有自动剪切功能的FMDV 2A 多肽构建的重组腺病毒有望开发成一种同时预防 PRRS 和CSF 的新型载体疫苗。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪瘟病毒；重组腺病毒；免疫原性 中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2010)03-0161-06 Immunogenicity of a recombinant adenovirus co-expressing porcine reproduction and respiratory syndrome virus GP5 protein and classical swine fever virus E2 protein in mice 1 1 1 1,2 1 1* LI Hong-yu , SUN Yuan , CHANG Tian-ming , HE Fan , HUANG Jun-hua , QIU Hua-ji (1. Division of Swine Infectious Diseases, National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China; 2. College of Animal Science and Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Huhhot 010018, China) Abstract: Classical sw