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研究生命活动的完整解决方案 Advance in ApoptosisAdvance in Apoptosis 李凌 BD Application specialist 2013.4.17 细胞凋亡概述 • 又称为程序性细胞死亡(Programmed Cell Death) 是机体主动的、高 度有序地清除无用细胞的过程。和细胞坏死(Necrosis) 相区别，坏 死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过 程。 薄膜有小泡状形成 细胞凋亡与疾病的关系 5 细胞凋亡事件发生表 细胞膜事件 线粒体事件 Caspase事件 细胞核事件 1. 细胞膜变化的检测：Annexin V/PI 磷脂酰丝氨酸(PS) 的检测：早期凋亡 早期凋亡PS检测及结果判定 早期凋亡特征： • 磷脂膜(PS)外翻，但是 细胞膜保持完整性， 因此PI染色为阴性 • DNA没有发生断裂 早期凋亡PS检测及结果判定 I P Annexin V-FITC 细胞膜变化的检测：Annexin V/PI 优点：简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞 样本设置： 1. 空白对照：辅助判断管，即不加Annexin V/PI ，但用它调电压的话，电 压偏高，即根据它确定的阴阳性界限是偏低的。 2. 阴性对照：未诱导的，Annexin V/PI双染，细胞绝大部分都 在双阴性区域，用它来确定两荧光通道的电压，这是为了排除非 特异性结合。 3. 单阳样本：诱导凋亡，Annexin V单染，用来调补偿 4. 单阳样本：诱导凋亡，PI单染，用来调补偿 注意事项： 1. 细胞制备或储存时细胞膜损伤，造成假阳性 2. 贴壁细胞消化时避免使用EDTA，螯合钙离子 Annexin V检测常见问题 1. 是否Annexin V Kits 可以检测小鼠或其他物种? • Annexin V试剂盒可以检测多种属 2. 这个试剂盒是否可用于贴壁细胞、固定或冻存的细 胞、或组织? • No. 上述样本的细胞细胞膜都会或多或少受到损害，这样的 样本建议用免疫荧光技术(Cat. No. 550911) 3. 是否与细胞表面标记兼容? CD11B/MAC-1 LY-71 • 只要Ca 离子不影响该表面Marker就可以同时做 BD Annexin V 流式检测试剂盒 Kit Cat no. Annexin V:FITC Apoptosis Detection Kit I 556547 Annexin V:FITC Apoptosis Detection Kit 556570 II-Contains unlabeled recomb. Annexin V Annexin V:PE Apoptosis Detection Kit I 559763 提供FITC, PE, APC,CY5,CY5.5, BD Horizon V450, BD Horizon V500 等多种荧光标记的Annexin V 以及纯净的Annexin V 。