海带多糖对损伤内皮细胞vWF释放和基因表达影响.pptVIP

海带多糖对损伤内皮细胞vWF释放和基因表达的影响 导 师： 谢露 教授 研究生： 王丽萍 立题依据 1） 海洋蕴涵着生物种类的80%以上,是生物多样性的巨大储存库。我国海带资源丰富,海藻类药物及保健品的开发一直是国内外研究的热点。它的大部分生物活性和其主要成分与多糖密切相关.褐藻糖胶具有明显的抗凝血的药理学活性，其副作用少，可作为预防血栓形成的药物或保健，且来源丰富。 2 ) 多种心血管疾病如动脉粥样硬化（AS）,高血压均易形成血栓，从而导致心，脑，肾等事件的发生。 目前，对AS，高血压的发病机制已逐渐偏重于血管内皮细胞，认为内皮细胞功能紊乱及其调控障碍可能是其发病关键。 大量的分子生物学实验研究表明:vVWF 是一种由血管内皮细胞和巨核细胞合成和释放的大分子糖蛋白,功能一是介导血小板黏附于受损的血管壁，能与血小板糖蛋白Ⅰb - Ⅸ和内皮下胶原结合,成为血小板粘附在 研究目的 1）从细胞生物学水平和分子生物学水平研究海带多糖抗血栓形成的机制。预期海带多糖的抗凝血作用，与其能抑制受损内皮细胞释放vWF、保护内皮细胞有关。 2）为临床心脑血管血栓形成疾病新药研制开发提供实验室依据。 科研设计方案 ◆海带多糖的提取(已完成） ◆动物模型的建立 ◆细胞培养建立模型 ◆测定所需指标，进行统计学处理。 细胞培养实验内容 1 测加入不同物质的培养液中细胞分泌vWF的水平， 筛选处于对数生长期的细胞，用肾上腺素刺激引起内皮细胞的损伤，观察不同因素对NE刺激内皮细胞释放vWF的影响 1）不同浓度NE对内皮细胞的影响 ELISA法测定培养液中vWF水平。 2） 海带多糖对NE刺激内皮细胞释放VWF的影响 ELISA法测定培养液中vWF水平。 3）阿司匹林对NE刺激内皮细胞释放VWF的影响 ELISA法测定培养液中vWF水平。 细胞培养实验内容 2 细胞培养实验内容 3 关键技术 1.海带多糖的提取、鉴定及纯品的分离制备。（已完成） 2.造大鼠动静脉环流模型，称血栓湿重，取血离心，ELISA法测血浆中vWF浓度。 3.选择脐静脉细胞株进行试验，筛选处于对数生长期的细胞进行细胞试验，LISA法测定培养液vWF浓度。 4.电镜下观察WP小体，看其中vWF的分泌情况以及各细胞器，以此判断海带多糖对内皮细胞的保护作用。 5.用定量PCR技术检测vWF基因的表达情况。 预期结果 预期海带多糖的抗凝血作用，与其能抑制受损内皮细胞释放vWF、保护内皮细胞有关。 研究进度 时 间 完成工作内容 2005.9---2005.12 动物培养模型建立 2005.12---2006.12 动物细胞培养模型建立 测定各组vWF基因mRNA表达 及电镜观察细胞内部超微结 构。 2006.1---2006.6 资料整理，论文书写 等 * * 内皮下的桥梁,还能与纤维连结蛋白一起与血小板糖蛋白Ⅱb/ Ⅲa 结合,诱导血小板聚集,参与血栓的形成。二是在循环中与FⅧ:C结合并稳定其活性。因此，vWF在血液凝固和血栓形成中发挥了重要作用。当内皮细胞受刺激活化或损伤时，vWF释放会增加，血浆vWF的水平就会增高。因而血浆vWF的水平变化即可作为血管内皮损伤的一个敏感指标，反映内皮细胞损伤程度，也可反映血管内血小板粘附、聚集和血栓形成的趋向。因此海带多糖保护血管内皮细胞、降低内皮细胞释放vWF的研究对基础研究和临床应用有着十分重要的意义。 3） 随着近代药理和临床的深入研究和仪器分析的发展，对海带营养成分和生物功能尤其是多糖组分有了进一步的认识，海带多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗氧化、抗疲劳、降脂、抗血栓、降血糖、放射防护等方面的生物活性。 在其抗血栓的研究中发现，海带多糖具有抗凝血、促纤溶、降低血粘度、降低血脂、抑制红细胞和血小板聚集，以及改善微循环的药理活性。在海带多糖对内皮损伤的大鼠血小板活性实验结果中提示，海带多糖在降低大鼠血小板粘附率和表面粘附聚集活性的同时，也降低血浆vWF水平。 动物实验 9，15时 腹腔注射 正常 对照组 生理盐水 对照组 海带多糖组 阿司匹林组 生理盐水 生理盐水 海带多糖 阿司匹林 连 续 给 药 三 天 制备动静 脉环流血 栓模型 测血栓湿 重，对比各 组对血栓形 成的影响 用