高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒ORF1a、ORF1b、ORF2-ORF7片段互换嵌合病毒的构建及其生物学特性的分析.pdfVIP

第 34卷 第 1期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34．NO．1 2012 年 1月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Jan． 2012 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．01．01 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒 ORF1a、 ORF1b、ORF2一ORF7片段互换嵌合病毒的构建 及其生物学特性的分析 姜一峰 ，周艳君 ，王亚欣，朱建平 ，徐彦召，童 武，虞凌雪，童光志 (中国农业科学院上海兽医研究所 猪病研究室，上海 200241) 摘 要：为研究高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒(HP—PRRSV)强弱毒之间毒力差异的分子基础，本实验分 别以HP—PRRSV强毒HuN—F5株及其传代致弱的疫苗病毒株HuN4．F112为亲本病毒，利用反向遗传操作技术分别 将 ORFla、ORFlb或 ORF2．7编码序列在强弱毒之间互换。将 6种含有不同嵌合基因的全长病毒基因组的重组质 粒体外转录后转染 BHK-21细胞 ，然后在 Marc．145细胞 中传代 ，拯救 的重组病毒经RT．PCR、测序和免疫荧光鉴 定，并分别命名为rHuN4．F5．ORFla、rHuN4．F5．ORFlb、rHuN4．F5．ORF2—7r以强毒为骨架)和 rHuN4．F112．ORFla、 rHuN4．F112．ORFlb、rHuN4．F112．ORF2．7(以弱毒为骨架)。进一步测定这些病毒在Marc．145上的生长曲线，结果 显示：以强毒为骨架的嵌合病毒rHuN4一F5一ORFla生长滴度显著高于亲本强毒rHuN4．F5，而以弱毒为骨架的嵌合 病毒 rHuN4．F112．ORFla在细胞上的生长滴度低于其亲本弱毒 rHuN4．F112，其他片段替换对病毒在细胞上的生长 没有 明显影响。本实验结果提示 ORFla对于PRRSV在体外细胞培养上的生长调节起重要作用。 关键词 ：猪繁殖与呼吸综合征病毒；嵌合病毒；ORFla；ORFlb；ORF2—7 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2012)01．0001．05 ‘、 ●I I I I I I I I — I ·I — I I I I eneratIOn and blOlOClIcaIcnaraCteriZati0n OtCnlm e¨C VIrUSeS whichsubstitutedORF1a，ORF1b，ORF2—7betweenhighly pathogenicporcinereproductiveandrespiratoryvirusandits attenuatedvaccinevirus JIANGYi—feng#，ZHOUYan-jun#，WANGYa—xin，ZHUJian—ping，XUYah—zhao，TONGWu， YU Ling—xue，TONG Guang-zhi (DivisionofSwineInfectiousDiseases，ShanghaiVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences， Shanghai200241，China) Abstract：Toinvestigatethemolecularmechanismsofthedifferentvirulencebetweenhighlypathogenicporcinereproductive andrespiratoryvires(HP—PRRSV)HuN4一F5strainanditsaRenuatedvaccinestrainHuN4-F1