实验七酶的性质影响因素实验.docVIP

实验七 酶的性质影响因素实验 一、目的要求 了解酶的活性影响酶促反应与pH、温度、抑制剂和活化剂对酶活性的重要影响。 二、原理 影响酶活性的因素比较多，如温度、pH、活化剂、抑制剂等，本实验就这些因素对酶活性的影响进行试验。 酶活性对pH极为敏感，每种酶通常只能在一定pH范围内表现活力，并且有一个表现为具有最高活性的pH，偏离最适pH较远，酶的活性越低，甚至消失，不同酶有不同的最适pH，如胃蛋白酶的最适pH为1.9，而胰蛋白酶的最适pH为8.1。人的唾液淀粉酶在pH3.8～9.4之间表现其活性，最适pH约为6.8。不同酶的最适pH值不同。然而，酶的最适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。例如，在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4-6.6，在醋酸缓冲液中则为5.6。一般作用时间长，最适温度低，而作用时间短，则最适温度高。人的唾液淀粉酶活性随着温度的升高而升高，直到37左右，温度更高时酶的活性则下降。其它的阴离子，如Br-、NO3-和I-?对该酶也有激活作用，但较微弱激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且常具有特异性。在本实验中，以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精分子，最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖。它们遇碘呈不同的颜色。直链淀粉（即可溶性淀粉）遇碘呈蓝色；糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色，最小的糊精和麦芽糖遇碘不显颜色： 由于在不同温度，不同pH，或者在有激活剂或抑制剂存在的条件下唾液淀粉酶的活性高低不同，则淀粉被水解的程度不同，所以，可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断，从而可了解上述诸因素对酶活性的影响。但需注意在碱性条件下碘会发生歧化反应，部分碘形成无色的碘酸盐、次碘酸盐，此时应增加碘液加入量。1.??唾液淀粉酶的制备 (1)??提取：实验者先用水漱口清洁口腔，然后含一小口（约5mL）蒸馏水于口中轻嗽一、二分钟。 (2)??稀释：将酶提取液用水定容至100mL。作为唾液淀粉酶的样品液。 （由于不同人或同一人不同时间收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同，稀释倍数可以是50～300倍，甚至超过此范围。） 1.试管及试管架 2.吸管 3.白瓷板 4.烧杯 5.水浴锅 6.量筒 7.漏斗与滤纸 8.滴管 （三）试剂 1.冰水； 2.0.1%CuSO4溶液； 3.0.3%NaCl的1%淀粉溶液：先用蒸馏水配制好0.3%NaCl溶液，然后称取1g可溶性淀粉与少量的0.3%NaCl溶液混合，之后倾入沸0.3%NaCl溶液直至稀释到100mL，需新鲜配制。 4.磷酸缓冲液（pH5.8，6.2，7.0，7.6，8.0五种）； pH 0.2mol/LNa2PO4 0.2 mol/LNaH2PO4 5.8 8.0mL 92.0mL 6.2 18.5mL 81.5mL 7.0 61.0mL 39.0mL 7.6 87.0ml 13.0mL 8.0 94.5mL 5.5mL 6.碘化钾-碘溶液：称取2g碘和g碘化钾溶于100mL水中。注意事项1.反应试管应清洗干净,不同酶液,试剂及其滴管不能交叉混用;2.使用混合唾液,或通过预试选出合适的唾液稀释度,效果更为显著.1/3饱和度时就抑制唾液淀粉酶的活性。 六、思考题 1．试根据淀粉的结构和性质，说明碘液可作检查唾液淀粉酶活性的指示剂的原理。 2．什么是酶促反应的最适pH？为什么pH也能影响酶促反应速度？ 3．在“抑制剂对酶活性的影响”实验中，加入Na2SO4的第3管有什么意义？