第一章 色谱基础.pptVIP

液相色谱基础 本 章 内 容 :液 相 色 谱 发 展 史液 相 色 谱 的 基 本 概 念影 响 峰 形 扩 展 的 因 素CH CH历 史 回 顾 2 3 H C 3 CH N 3 N 1906 - Mikhail Semenovich Tswett 1872-1919 Mg N N 碳 酸 钙 吸 附 剂 CH 3 石 油 醚 0 CH 3 0 0 1940‘s - 分 配 色 谱 和 纸 色 谱 0 0 1950‘s - 气 相, 薄 层 , 凝 胶 过 滤 色 谱 CH CH CH 3 3 3 梯 度 洗 脱 色 谱 1960‘s - 商 业 高 效 液 相 色 谱.H HP PL LC C 结 结 构 构 框 框 图 图 高 效 液 相 色 谱 进样口HPLC 混合器 泵 色谱图 色谱柱 检测器 溶 剂液 相 色 谱 类 型 化 合 物 类 型 模 式 固 定 相 流 动 相 Types of Compounds Mode Stationary Phase Mobile Phase Separated 中 性 反 相 C18, C8, C4 水/ 有 机 改 性 剂 Neutrals 氰 基, 氨 基 弱 酸 Reversed-Phase C-18, C-8, Water/Organic Weak Acids C-4, C-2 Modifiers 弱 碱 Weak Bases Io 子n- 离 子 、 碱 性 、 酸 性 C-18, C-8 水/ 有 机 的 离 子 对 试 剂 离 对 C-18, C-8 Water/Organic Ionics, Bases, Acids Pair Ion-Pair Reagent Compounds Insoluble in Normal-Phase Silica, Amino, Cyano Organics 不 Wa 溶 te 于 r, O 水 rg 的 an 化 ic 合 Iso 物 mers 正 相 硅 胶 、 氨 基 、 腈 基 、 有 机 物 Diol 二 醇 Anion or Cation Ionics Ion Exchange Aqueous/Buffer Exchange Inorganic Ions 离 子 型 无 机 离 子 离 子 交 换 阴 离 子 或 阳 离 子 交 换 水/ 缓 冲 溶 液 Counter Ion Resin 树 脂 对 离 子 Gel Filtration- High MW Compounds Size Exclusion Polystyrene Aqueous Silica Polymers 高 分 子 量 化 合 物 体 积 排 阻 聚 苯 乙 烯 凝 胶 过 滤 - 水 性 的 Gel Permeation- Organic 凝 胶 渗 透 - 有 机 的 聚 合 物 硅 胶色 谱 参 数 - 定 性 和 定 量 tRB tRA t0 A B W W A B Time t 保留时间 tRB - tRA tRB - tRA R R 2 1.176 0 t 死时间 WA + WB W1/2A + W1/2B W 峰底宽度 tR-t0 K’ t0 Detector Response Inject不 同R 值 的 峰 重 叠 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.00 1.25 R1.5 可 以 得 到 基 线 分 离影 响R 值 的 因 素 Δt α- 1 k x x 1/4 N R 1 + k α W 柱 效 选 择 性 容 量 因 子容 量 因 子 各组份的容量因子(K’ )随溶剂洗脱强度的 变化增大或缩小 溶 剂 洗 脱 强 度 弱 1100 60% Acetonitrile 700 40% Water 300 100 2 4 6 8 10 Time min. 增加流动相的洗脱强度,降低了洗脱物的容量因子 溶 剂 洗 脱 强 度 强 2000 1600 80% Acetonitrile 20% Water 1000 600 0 6 8 10 2 4 Time min. 对于反相色谱,增加10 %的有机组成等于降低每个色谱峰的K’ 值的1/2 到2/3 。 mA mA U U分 离 选 择 性 α k B α k A A B A B A B 2 2 3 1 1 2 t 0 1 k 1.64 1.15 0.95 B 1.04 1.35 1.50 α α α A k 1.58 0.85 0.63 改用不同的流动相 改变流动相的组成 改变流动相pH 值 改 变 分 离 选 择 性 α 的 方 法 改变柱温 应用特殊的化学效应 改变固定相温 度 对 分 离 选 择 性 α的 影 响 40 ℃