秦艽细胞悬浮培养的研究.pdf

论文题目： 秦艽细胞悬浮培养研究 申请学位学科：工 学 所学学科专业：生物化工 培 养单位：生命科学与工程学院 硕士生：陈如意 导 师：齐香君教授 2010年5月 fff『f舢舢4 122 inPartial Fulfillmentofthe forthe of RequirementDegree Master of．E．．．．n．．．e．．．i．．n．．．．e．．e．．．r．．．i．．n．．．g．． Thesis Supervisor：Professor QiXi垒壁gj坠塾 May，2010 细胞悬浮培养研究 摘要 roside)为裂环环烯萜苷类化合物，具有保 菌、抗病毒、抗氧化、健胃、抗溃疡等药 开发新药具有良好的应用前景，但随着龙 源问题突现。本论文选用秦艽为研究材料， 养的方法生产龙胆苦苷，以期解决龙胆苦 累量为指标，以高效液相色谱法为分析手 段，研究了高产细胞系的筛选、培养条件的优化；研究了细胞生长、 龙胆苦苷积累及主要营养成分的消耗关系与规律。研究结果如下： 1．采用紫外诱变一小细胞团法筛选得到高产龙胆苦苷的细胞系 UV-4．b，该细胞系龙胆苦苷含量为O．242 mg／g，比筛选前提高了 64．63％。 2．本论文细胞种龄、装液量影响的试验结果，结合前期课题组 7．0、 研究，得到最佳悬浮培养条件为：MS为基本培养基、初始pH 30 5d，装液量为40％～50％，25℃、 g／L蔗糖为碳源、接种细胞种龄为l l10r／min下暗培养。 3．诱导子对秦艽悬浮细胞影响结果表明：1 00mg／L黑曲霉诱导 子及20mg／L蜜环菌诱导子，使龙胆苦苷含量比对照组分别提高了 12．3％、1 酵母菌诱导子对秦艽细胞生长及龙胆苦苷的积累都有明显的抑制作 用。 4．秦艽悬浮细胞的生长受初始蔗糖、氮、磷浓度的影响。不同 蔗糖浓度影响细胞的指数生长期持续时间，从而影响最大生物量； 不同氮浓度影响细胞延滞期持续时间；不同磷浓度影响细胞生长形 态，高磷浓度(2．5mmol／L及5mmol／L)对于细胞生长不利。适合 细胞生长的蔗糖浓度为：3o～50 0．625～1．25mmol／L。 5．秦艽悬浮细胞中龙胆苦苷含量呈现两阶段积累的情况。龙胆 苦苷积累与细胞生长有关，符合延滞期越短，龙胆苦苷开始积累越