水稻DNA提取方法.docVIP

水稻叶片DNA提取方法（SDS小量提取法） 一、提取方法 1、取叶片适量，置于1.5 ml离心管中，加入液氮磨碎。 2、向离心管中加入700μl 已预热至65℃的SDS提取液，迅速搅匀后置于65℃水浴中，水浴30 min。 3、向离心管中加入200μl 5 M KAc（醋酸钾）溶液，颠倒充分混匀，冰浴30 min。 4、冰浴之后，4℃或室温下10000rpm离心5min（转速及时间根据离心机调整），将上清液（上层液）倒入另一新的1.5 ml离心管（已高压灭菌）。若有杂质，可再离心，将上清液转入新的离心管中。 5、加入等体积（700μl）异丙醇，置于﹣20℃ 30 min。 6、4℃或室温10000rpm离心5min。弃上清。 7、加入70%乙醇（600μl ～ 1 ml）清洗DNA后，倒出乙醇（注意：不要将DNA倒出）。 8、将离心管置于超净工作台4 h或过夜（视乙醇挥发情况而定），使DNA风干。 9、向风干的DNA离心管中加入100μl（根据提取的DNA量调整）TE溶液，室温放置1～2天后使用（55℃水浴1 h有助于溶解）。 10、将溶解后的DNA保存于4℃（短期）或-20℃（长期，尽量避免反复冻融）。 二、溶液配方 SDS提取液（1000 ml） 试剂 用量 定容后终浓度 ①1 M Tris-HCl（pH 8.0） 100 ml 0.1 M ②5 M NaCl 100 ml 0.5 M ③0.5 M EDTA（pH 8.0） 100 ml 0.05 M ④10% SDS 125 ml 1% 加蒸馏水定容至 1000 ml ①1 M Tris-HCl（pH 8.0）：（100 ml） 称取12.114 g（0.1 mol）Tris溶于约80 ml蒸馏水中，用浓HCl调pH至8.0（配100 ml溶液约加6 ml浓HCl溶液），定容至100 ml。 ②5 M NaCl：（100 ml） 称取29.22 g（0.5 mol）NaCl溶于蒸馏水中，定容至100 ml。 ③0.5 M EDTA（pH 8.0）：（100 ml） 称取18.612 g（0.05 mol）Na2EDTA·H2O 溶于约80 ml蒸馏水中，用NaOH调pH至8.0（配100 ml溶液约加NaOH固体2.4 g或10M NaOH溶液6 ml），定容至100 ml。 ④10% SDS：（125 ml） 称取12.5 g SDS溶于约100 ml蒸馏水中，定容至125 ml。