不同种子细胞复合壳聚糖水凝胶构建可注射组织工程髓核的比较.pdfVIP

806 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, July 2010, Vol. 24, No.7 · · 不同种子细胞复合壳聚糖水凝胶构建可注射 组织工程髓核的比较研究 王建 刘杰 田华科 李长青 周跃 【摘  要】 目的 比较兔髓核细胞（nucleus pulposus cells ，NPCs ）和BMSCs 在温敏性壳聚糖水凝胶支架中的生长 及细胞外基质合成，筛选用于构建可注射组织工程髓核的种子细胞。  方法 取3 周龄新西兰乳兔，体重150 ～ 200 g ，雌 雄不限，分离培养兔NPCs ；取1 月龄新西兰白兔，体重1.0 ～1.5 kg，雌雄不限，穿刺抽取骨髓分离培养BMSCs 。以壳聚 糖、β 甘油磷酸钠水溶液和羟乙基纤维素溶液为原料制备壳聚糖水凝胶支架。取第2 代NPCs 和第3 代BMSCs 分别与壳 聚糖水凝胶混匀，构建可注射组织工程髓核。复合培养2 d ，观察NPCs 和BMSCs 在壳聚糖水凝胶中的存活情况；复合培 养 1 周，扫描电镜观察两种细胞在支架中的生长分布；复合培养3 周，行组织学、免疫组织化学检查，并用RT-PCR 检测组 织工程髓核中聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA 的表达。  结果 温敏性壳聚糖水凝胶室温呈液态，37℃放置15 min 发生 交联反应成为半固态凝胶。吖啶橙/ 碘化丙啶染色示壳聚糖水凝胶中多数NPCs 和BMSCs 存活，少数死亡，细胞存活率 均 90% 。扫描电镜示NPCs 和BMSCs 分布于网状支架中，细胞表面有分泌的细胞外基质。HE 染色、番红O 染色及免 疫组织化学染色显示细胞具有分泌细胞外基质的功能。RT-PCR 检测示NPCs 在壳聚糖水凝胶支架中复合培养3 周，Ⅱ型 胶原、聚集蛋白聚糖mRNA 表达量分别为 0.564 ± 0.071 、0.725 ± 0.046，BMSCs 复合培养物分别为0.713 ± 0.058、0.852 ± 0.076，两种细胞比较差异均有统计学意义（P 0.05 ）。  结论 温敏性壳聚糖水凝胶具有良好的细胞相容性，与NPCs 比 较，BMSCs 复合壳聚糖水凝胶培养保持了更好的形态、增殖及细胞外基质合成功能。 【关键词】    组织工程髓核 髓核细胞 BMSCs 温敏性壳聚糖水凝胶 兔 中图分类号： R681.5 Q813 文献标志码：A COMPARISON STUDY ON INJECTABLE TISSUE ENGINEERED NUCLEUS PULPOSUS CONSTRUCTED BY DIFFERENT CELLS AND CHITOSAN HYDROGEL/WANG Jian, LIU Jie, TIAN Huake, LI Changqing, ZHOU Yue. Department of Orthopedics, Xinqiao Hospital, the Third Military Medical University, Chongqing, 400037, P.R.China. Corresponding author: WANG Jian, E-mail: tonywjxq@ 【Abstract 】 Objective  To compare the growth and extracellular matrix biosynthesis of nucleus pulposus cells (NPCs) and bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in thermo-sensitive chitosan hydrogel and to choose seed cells for injectable tissue engineered nucleus pulposus. Methods  NPCs were isolated and cultured from 3-we