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实验一 氨基酸的分离鉴定—纸层析法 实验目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。 实验原理 纸层析法使用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。层析溶剂由有机溶剂和水组成。 物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf 值（比移）来表示的： 在一定的条件下某种物质的Rf 值是常数。Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、 层析滤纸的 质量和层析温度等因素有关，本实验利用纸层析法分离氨基酸。 实验器材 1、层析缸① 2 、毛细管 3、喷雾器 4 、培养皿 5、层析滤纸（新华一号） 实验试剂 1、扩展剂 650ml 是4 份水饱和的正丁醇和1 份醋酸的混合物。将20ml 正丁酸和5ml 冰醋酸放入分液漏 斗中，与 15ml 水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层。取漏斗内的扩展剂约5ml 置于小烧杯中做平衡溶剂，其余的倒入培养皿中备用。 2 、氨基酸溶液 0.5% 的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的 混合液（各组份浓度均为0.5% ）各5ml 3、显色剂 0.1%水合茚三酮正丁醇溶液50—100ml 实验操作 1、将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。 2 、取层析滤纸（长22cm、宽14cm）一张。在纸的一端距边缘2-3cm 处用铅笔划一条直线， 在此直线上每间隔2cm 作一记号如上图。 3、点样 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这 6 个位置上(如下图) ，干后再点一次。每点 在纸上扩散的直径最大不超过3mm 。 4 、扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约 20ml 扩展剂的培养皿迅速 置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点 样线 1cm）。待溶剂上升 15—20cm 时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或 用吹风机热风吹干。 图1.2.1 氨基酸纸层析示意图 0 5、显色 用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5 分钟（100 C ） 或用热风吹干即可显出各层析斑点。 6、计算各种氨基酸的Rf 值。 思 考 题 1、何谓纸层析法？ 2 、何谓R 值？影响R 值的主要因素是什么？ f f 3、怎样制备扩展剂？ 4 、层析缸中平衡溶剂的作用是什么？ 5、比较各种氨基酸Rf 值的大小，并分析原因。