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徐州工程学院毕业设计 (论文 ) 摘要 本文使用含镉培养基对牛蒡根际的耐镉菌株进行筛选分析,获得四株耐镉性能较强的 菌落:NP22 ,NP23 ,NP30 ,NP39 ,对其中耐镉较强菌株 NP39 进行了分子鉴定和耐镉特 性分析。通过 PCR 方法获得菌株 16S rDNA 序列,经过序列分析,确定NP39 是Pseudomonas sp. 。将 NP39 在含不同浓度 CdSO4 的液体 LB 培养基中进行连续培养,分析菌体的生长情 况,结果表明,随着镉浓度的增大,菌株达到平台期的时间会延迟,但在 CdSO4 浓度在 200 mg/L 及以下时,所能达到的最终浓度是相近的,OD600 都在 2.5 附近。采用 SDS 法进行质 粒消除,用鉴别培养基初步分析出 NP39 的抗镉基因在质粒上。用假单胞菌质粒制备法提 取大质粒,结果显示NP39 的抗性基因在大质粒上。分析 NP39 对 Fe2+ ,Cu2+ ,Mn2+ ,Ni2+ , Zn2+等其他重金属的耐受性,结果显示 NP39 对这四种重金属都有一定抗性,其中对 Cu2+ 的抗性较强,在 400 mg/L 以上。分析 NP39 对 Ap ,Kn 等其他抗生素的耐受性,结果显示 NP39 对 Ap 有较强的抗性。 关键词: 重金属耐受性;镉;Pseudomonas ;质粒消除 II 徐州工程学院毕业设计 (论文 ) Abstract In this paper, four strains with resistance to high concentration of cadmium were isolated from Arctium lappa rhizosphere using cadmium medium, and the strains are NP22, NP23, NP30, NP39. Strain NP39 was analyzed with molecular identification and resistance mechanism. 16S rDNA sequence was cloned by PCR, and the result shows, NP39 is Pseudomonas sp. NP39 Growth analysis was carried out in liquid LB with different CdSO concentration. The result 4 shows that with the CdSO concentration increasing, the growth rate decreases, and all the OD 4
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