一站式SDS-PAGE电泳套装.doc

一站式SDS蛋白电泳套装 产品及特点 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此华越洋生物开发了本产品。它具有下列特点: 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。 安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。 灵活，分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。 使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。 电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。 规格及成分 成份 30次包装 保存温度 丙烯酰胺干粉 60 g RT 甲叉双丙烯酰胺干粉 3 g RT 分离胶缓冲液，4× 200 mL RT 浓缩胶缓冲液，4× （含染料） 100 mL RT TEMED 1.5 mL 4℃ 过硫酸铵（干粉） 1 g RT SDS上样液，5× 1套（1 mL） -20℃ SDS电泳液，1×（干粉） 1套（20 L） RT 使用手册 1份 运输及保存 常温运输和保存，但TEMED和5×SDS上样液需低温运输，分别在4℃和-20℃有效期一年。 自备试剂 去离子水 使用方法 第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146 mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200 mL 30%丙烯酰胺溶液（用手大约摇10-20分钟）。 第一次使用本产品时还需配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液(30% AB溶液，下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙烯酰胺。对SDS电泳，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙烯酰胺干粉加入到200 mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中(注意：甲叉双丙烯酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在１月内用完。 根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表： 蛋白质大小范围（kD） 7% 5.17 2.33 2.50 7.5% 5.00 2.50 2.50 8% 4.83 2.67 2.50 9% 4.50 3.00 2.50 10% 4.17 3.33 2.50 11% 3.83 3.67 2.50 12% 3.50 4.00 2.50 13% 3.17 4.33 2.50 14% 2.83 4.67 2.50 15% 2.50 5.00 2.50 16% 2.17 5.33 2.50 配制浓缩胶（一般使用4%的浓度）：在一个25 mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10 mL４％浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。 胶浓度 用量（单位：mL） 水 30%ＡＢ溶液 4×浓缩胶缓冲液 （含蓝色染料） 4% 6.17 1.33 2.50 将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。 分别加入50 uL 10%APS和30-50 uL TEMED（这是配制10 mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加），迅速摇匀。 先灌分离胶，在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。 由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。 拔出梳子，用1×SDS电泳液冲洗加样孔。 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的1×SDS电泳液。本产品提供20升的SDS电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS电泳液，用时再稀释成1×工作液。 在蛋白质样品中加入5×SDS上样液（4uL样品中加1uL上样液），100℃煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。 先用10 mA的电流电泳（对0.75 mm厚×14 cm×14 cm的胶）直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。 将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。 400-818-1148 7*24H订货咨询:150 1148 1284