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本科毕业论文（设计）手册 ( 届) 题 目：pET3c-TAT-HA-aFGF27-154重组质粒的 鉴定与蛋白表达优化 学 院： 专 业： 药 学 学 号： 姓 名： 指导老师： 职称： 合作老师： 职称： 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………5 外文摘要…………………………………………………………………………………6 引言……………………………………………………………………………………7 1．实验材料……………………………………………………………………………7 1.1质粒和菌种……………………………………………………………………7 1.2试剂和仪器…………………………………………………………………8 2．实验步骤………………………………………………………………………10 2.1质粒的双酶切鉴定…………………………………………………………10 2.2大肠杆菌感受态细胞的制备………………………………………………10 2.3重组质粒转化…………………………………………………………11 2.4重组蛋白的诱导条件优化…………………………………………………11 2.5蛋白表达形式的确定…………………………………………………11 2.6 SDS蛋白电泳…………………………………………………12 3．实验结果…………………………………………………………………………13 3.1重组质粒的鉴定………………………………………………………………13 3.2重组质粒的转化………………………………………………………………13 3.3重组蛋白TAT-HA-aFGF27-154诱导表达条件的优化…………………………14 3.4蛋白表达形式的确定……………………………………………………15 4．讨论………………………………………………………………………………15 参考文献……………………………………………………………………………18 致谢……………………………………………………………………………………19 pET3c-TAT-HA-aFGF27-154重组质粒的鉴定与蛋白表达优化aFGF27-154)融合蛋白。方法：双酶切法鉴定重组质粒pET3c-TAT-HA-aFGF27-154，制备大肠杆菌感受态细胞，将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主细胞中，通过表达条件的优化获得融合蛋白，经CM离子交换层析与肝素亲和层析纯化，最终获得蛋白纯品。结果：经双酶切法鉴定，重组质粒pET3c-TAT-HA-aFGF27-154序列正确。将正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后，获得表达工程菌E.coli BL21(DE3)/ pET3c-TAT-HA-aFGF27-154。37℃条件下，经1 mM IPTG诱导5 h后，获得融合蛋白TAT-HA-aFGF27-154的表达，蛋白表达率在30%以上。 关键词：穿膜肽；非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子；蛋白表达 Plasmid Identification and optimization of protein expression of pET3c-TAT-HA-aFGF27-154 Abstract: Objective: Expression highly and purification penetrating peptide(TAT) Recombinant Human Non-mitogenic acidic fibroblast growth factor(aFGF27-154) fusion protein. Methods： To get the recombinant plasmid by double digestion pET3c-TAT-HA-aFGF27-154, Preparation of competent cells of E. coli, will identify the correct recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3) host cells, optimization of expre