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Pickering 柱后衍生系统 简易操作手册 安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部 一.培训目的: 了解 Pickering 柱后衍生装置 PCX 5200，Vector PCX，Pinnacle PCX 三种型号的硬件操作。 了解两种典型应用分析的基本原理。 掌握Pickering 柱后衍生装置的开机，关机以及柱后衍生分析的注意 事项。 二.仪器配置: 在线脱气机(推荐使用) 二元泵或四元泵 自动进样器或手动进样器 柱温箱(可选) 荧光检测器 紫外检测器 化学工作站 Pickering 柱后反应仪 Pickering 氨基甲酸酯分析套包或氨基酸分析套包 三.典型应用的分析方法 氨基甲酸酯分析 氨基甲酸酯类农药的结构中均含有下N-甲基氨基甲酰基，在USEPA方 法531.1中列出了十种分析物的结构式如下图（包含1-萘酚和内标 BDMC）。它们按照在C18柱上的流出顺序列出。除了1-萘酚外，它们 均含有N-甲基氨基甲酰基部分（用OR表示），甲萘威carbaryl(9)在 柱后反应器中也水解产生1-萘酚，注意从甲萘威carbaryl(9)水解产 生的1-萘酚与标样中的1-萘酚的保留时间不同，这对故障排除非常有 用。氨基甲酸酯的分离可通过Pickering 5u 25cm C18或C8柱在42℃ 或37℃下分离。 分离后的氨基甲酸酯农药首先在100℃下在NaOH作用下水解释放出 醇，碳酸盐和甲胺。在第二个柱后反应中甲胺与邻苯二甲醛（OPA和 2-巯基乙醇反应生成有强荧光吸收的1- 甲基-2-蚓哚类化合物，被荧 光检测器检测且具有很低的检测限，满足EPA方法的要求。 氨基甲酸酯分析的柱后条件： 衍生试剂1：水解衍生试剂CB 130 衍生试剂2：100mg OPA, 2g Thiofluor溶解于950mL CB 910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度 衍生试剂流速：0.3mL/min 检测： 荧光检测器：λ ex 330nm , λ em 465nm 氨基甲酸酯分离柱0846250 （4.6×250mm）, C18, 5um 氨基酸分析 氨基酸的衍生化有两种方法。第一种是茚三酮 （Ninhydrin）衍生 化，茚三酮与一级氨基酸反应产生深蓝色或紫色，称为罗曼紫，吸收 波长570nm；茚三酮与二级氨基酸反应产生一种黄色物质，吸收波长 440nm。这个反应需要130℃高温和500ul反应器。 第二种是邻苯二甲醛 （OPA）衍生化，可以用于一级氨基酸的高灵敏 度检测。 一级氨基酸与邻苯二甲醛和N,N-二甲基-2-巯基乙胺在弱碱 性条件下反应生成一种有荧光响应的异吲哚衍生物。二级氨基酸不能 发生此反应，必须通过先氧化经两步反应检测二级氨基酸，这是该法 的缺点。这个反应需要150ul反应器和45℃反应温度。 可以看出氨基酸分析只需要配置单泵衍生系统，如使用双泵衍生系 统，可以关闭第二个试剂泵，加热反应器出口管线可以绕过第二个混 合器和常温反应器，直接连接检测器。 氨基酸分析可以使用Pickering分析套包中的离子交换柱分离，流动 相体系和再生试剂均包含在分析套包内，是一种低速高分辨率的方 法，可以分离生物体液或组织提取物等复杂混合物中的46种氨基酸。 氨基酸柱后衍生分析对于LC的要求： 1. 四元梯度泵，最好配备柱塞清洗组件； 2. 进样器要使用Tefzel或者PEEK材料的转子，否则不能承受再生试 剂高达12+的pH； 3. 不要使用不锈钢溶剂过滤头，洗脱试剂中的锂盐或者钠盐在暴露 于空气中的情况下会轻度腐蚀不锈钢； 4. 彻底冲洗LC管路，该衍生反应对于污染物非常灵