大鼠骨髓间质干细胞的BrdU体外标记和体内示踪研究.docVIP

 大鼠骨髓间质干细胞的 BrdU 体外标记和体 内示踪研究# 张明鸣1，贾贵清2，程惊秋3，杨平1，陆燕蓉3，伍晓汀1* 5 （1. 四川大学华西医院普通外科，成都 610041； 2. 四川省人民医院普外科，成都 610041； 3. 四川大学华西医院 卫生部移植工程与移植免疫重点实验室，成都 610041） 摘要：目的 探讨骨髓间质干细胞（BMSCs）的体外标记和体内示踪技术。方法 分离培养 10 并鉴定大鼠 BMSCs，进行 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记后，体外培养被标记的 BMSCs， 观察其连续传代后的 BrdU 可标记时间和标记效率；建立大鼠胃黏膜损伤模型，将分离纯化 的 BrdU 标记 BMSCs 移植到损伤的胃黏膜下，体内观察 BrdU 对活体移植 BMSCs 的示踪作 用。结果 免疫组化显示体外培养大鼠 BMSCs 的 CD44、CD90 表达阳性，CD14、CD45 表达阴性，显微结构表现出干细胞特征。进行 BrdU 标记后，标记阳性率随标记时间延长而 15 增高，48h 达高峰，72h 仍维持高阳性率。终浓度为 10 μ mol/L 的 BrdU 孵育 48h、72h 阳 性标记率高于 5 μ mol/L BrdU 组（P 0.05），但与 15 μ mol/L BrdU 组阳性标记率差异无 统计学意义（P 0.05），并且连续传代培养后也可检测到，标记时间长达 21 d。BrdU 可示 踪 BMSCs 在损伤的胃粘膜下局部定植。结论 BrdU 在浓度为 10μ mol/L，标记时间 48h 至 72h 标记效率较高；BrdU 标记可用于一定时间段内 BMSCs 移植入体内后定植和生长的动 20 25 30 35 40 45 态示踪观察方法。 关键词：5- 溴脱氧尿嘧啶核苷；骨髓间质干细胞；细胞培养 中图分类号： R329.24 In vitro analysis and in vivo tracing of BrdU-labeled rat bone marrow mesenchymal stem cells ZHANG Mingming1, JIA Guiqing2, CHENG Jingqiu3, YANG Ping1, LU Yanrong3, WU Xiaoting1 (1. Department of General Surgery,West China Hospital, Sichuan University,Chengdu 610041; 2. Department of General Surgery,Sichuan Provincial Peoples Hospital,Chengdu 610041; 3. the Key Laboratory of Transplant Engineering and Immunology, Ministry of Health, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041) Abstract: Objectives To investigate the optimal condition of BrdU labeling for BMSCs in vitro and the feasibility of in vivo tracing of BrdU-labeling BMSCs. Methods BMSCs were isolated from Wistar rats and were in vitro routinely cultured. The third passage BMSCs was used for identification of special surface antigens by immunohistochemical methods. The purified BMSCs were incubated with bromodeoxyuridine (BrdU) at different concentrations for different incubating time to investigate optimal BrdU concentration and incubating time for cell labeling. The cell labeling index of BrdU was calculated with immunohistochemical analysis. BMSCs labeled BrdU were injected into damaged gastric